《PEDF活性透皮短肽篩選及局部套用皮膚鱗癌的實驗研究》是依託南昌大學，由李春明擔任項目負責人的地區科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：PEDF活性透皮短肽篩選及局部套用皮膚鱗癌的實驗研究
- 項目類別：地區科學基金項目
- 項目負責人：李春明
- 依託單位：南昌大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
皮膚鱗狀細胞癌是皮膚常見惡性腫瘤，發病率逐年上升。色素上皮衍生因子（PEDF）是一種強效的內源性抗腫瘤蛋白，近年來發現PEDF低分子短肽經皮吸收後可以抑制血管新生。我們前期研究發現：PEDF廣泛表達於正常皮膚及附屬器，在人皮膚鱗癌組織中表達降低且抑制皮膚鱗癌A431細胞增殖，故提示PEDF可能在抗皮膚鱗癌中發揮重要作用。本課題擬通過體外刺激以及皮膚鱗癌細胞過表達PEDF，探討PEDF對皮膚鱗癌細胞功能及MAPK通路的影響；進一步採用蛋白表達純化、合成短肽等方法，篩選出6-7胺基酸的活性短肽並檢測其皮膚滲透性；最後建立皮膚鱗癌動物模型，局部套用PEDF活性短肽觀察其抑瘤效果，探討PEDF短肽的作用機制以及靶點。該研究旨在明確 PEDF對皮膚鱗癌細胞功能學影響,篩選出活性的PEDF抗皮膚鱗癌短肽，為開展皮膚鱗癌的高效、非損傷性局部治療方法提供理論支持和實驗依據。
結題摘要
皮膚鱗狀細胞癌是皮膚常見惡性腫瘤。色素上皮衍生因子是一種強效的內源性抗腫瘤蛋白，且近年發現外塗小分子PEDF短肽可以改善小鼠銀屑病模型血管新生和皮膚增厚情況。我們的課題研究目的就是篩選出抗皮膚鱗癌的PEDF活性短肽，經皮膚吸收後可以抑制皮膚鱗癌生長。我們發現皮膚鱗癌A431細胞表達PEDF mRNA和蛋白，PEDF抑制A431細胞增殖和遷移。為了觀察皮膚鱗癌細胞過表達PEDF對其功能影響，我們構建了PEDF-pEGFP-N1表達載體，HeLa細胞瞬時轉染該質粒後能表達PEDF融合蛋白，然而皮膚鱗癌細胞株A431細胞和SCL-1細胞轉染該質粒後均未能穩定表達PEDF融合蛋白。此外，PEDF在正常生長期毛囊及體外培養的毛囊外毛根鞘細胞均有表達。PEDF在皮脂腺組織和體外培養的皮脂腺細胞均有表達。我們把PEDF分成PEDF1、PEDF2和PEDF3 3個長肽，通過構建原核表達載體，合成PEDF1、PEDF2和PEDF3融合蛋白並分離純化。通過CCK-8增殖實驗，我們發現PEDF3抑制A431細胞和SCL-1細胞增殖。我們把PEDF3分成3個更小的18-20胺基酸，人工合成短肽，發現短肽分子P12673和P12674可以抑制A431細胞和SCL-1細胞增殖。我們把P12673和P12674分成6個更小的6-7胺基酸，人工合成短肽，發現P13445和P13446 能抑制A431細胞和SCL-1增殖。我們採用生物素標記 P13445、P13446短肽分子，溶解後外塗於裸鼠的局部皮膚，2 小時後通過免疫螢光發現血管內和血管壁檢測到P13445、P13446短肽表達。成功構建小鼠皮膚鱗癌模型，給予小鼠外塗P13445、P13446短肽分子，發現P13446短肽分子抑腫瘤生長。通過Western-blot檢測發現，P13445組PCNA 和MMP-9蛋白表達降低，而P13446組更低。通過以上這些體內外的研究，我們發現P13346短肽分子能透過皮膚表皮，體內體外均證實對皮膚鱗癌有抑制作用，有希望作為皮膚鱗癌的高效、非損傷性局部治療方法。
