O157型大腸埃希菌基因擴增檢測是指將O157型大腸埃希菌的DNA片段經過變性、退火、延伸循環，不斷拷貝，以擴增出足量的DNA供檢測鑑定。
基本介紹
- 中文名：O157型大腸埃希菌基因擴增檢測
- 參考值：陽性表明存在感染
- 臨床意義：用於O157型大腸埃希菌的早期診斷
操作方法,正常參考值,臨床意義,
操作方法
1．基本原理
以單鏈DNA為模板，4種脫氧核苷酸為底物，在引物存在的情況下，用聚合酶進行互補鏈的延伸，通過多次反覆的循環使微量的模板DNA得到極大程度的擴增。
2．操作步驟
（1）細菌滅活：為防止臨床檢驗標本在實驗室內造成污染並危害實驗人員，在分離DNA前應進行細菌滅活處理。常用3%雙氧水滅活細菌。
（2）細菌裂解：滅活細菌後，需要裂解細菌，消化去除染色體組蛋白使靶基因單獨游離，用於PCR擴增反應。一般可採用蛋白酶K加表面活性劑法、蛋白變性劑加表面活性劑煮沸法、反覆凍融法、超音波法或溶菌酶加表面活性劑法等裂解細菌。
（3）模板DNA提取：用酚-氯仿抽提含有經過細菌裂解的溶液，然後用乙醇從抽提後的溶液中沉澱目標DNA。
（4）模板DNA變性：O157型大腸埃希菌基因擴增所選的靶基因主要有溶血素hlyAB基因、eae基因、STL基因等。加熱使模板DNA在高溫下變性，雙鏈間的氫鍵斷裂而形成兩條單鏈。
（5）模板DNA與引物的退火：使溶液溫度降至50℃～60℃，模板DNA與引物按鹼基互補配對原則結合，形成模板與引物複合物。
（6）引物的延伸：溶液反應溫度升至72℃，以引物為固定起點，在耐熱DNA聚合酶作用下，由5'至3'方向合成DNA。
以上提到的“變性-退火-延伸”即為一個循環，經過25到30次循環後，DNA可擴增106～109倍，用於檢測。
正常參考值
1.陽性表明存在O157型大腸埃希菌感染。
2.如操作不嚴格則會出現假陽性和假陰性結果。
臨床意義
O157型大腸埃希菌感染的潛伏期較長，且感染後某一時期患者糞便中致病菌數量急劇減少，因此用細菌分離培養的方法很難檢出O157型大腸埃希菌。而基因擴增檢測簡便快速、靈敏度高、特異性好，可用於O157型大腸埃希菌的早期診斷和流行病學調查。
