NOB1在耳蝸毛細胞凋亡中的作用及分子機制

《NOB1在耳蝸毛細胞凋亡中的作用及分子機制》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由韓宇擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：NOB1在耳蝸毛細胞凋亡中的作用及分子機制
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：韓宇
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

感音神經性耳聾嚴重影響人類的生活質量，其發病的分子機制尚未闡明。鋅帶蛋白NOB1可能在基因轉錄、細胞凋亡、細胞周期調控、腫瘤發生等多種生理病理過程中發揮重要作用。本課題組率先製備了NOB1的單克隆抗體，發現NOB1在耳聾哺乳動物內耳毛細胞中的表達顯著上調，且NOB1的表達強度與毛細胞凋亡密切相關。因此，推測NOB1可能通過調控細胞凋亡在耳聾發生髮展中扮演重要角色。本項目擬利用基因轉染技術改變NOB1在耳蝸毛細胞中的表達，藉助體內外實驗研究NOB1在耳蝸毛細胞凋亡中的作用，通過細胞凋亡PCR晶片及阻斷劑干預實驗探索NOB1參與耳蝸毛細胞凋亡的分子機制。以期證明NOB1是一個新的耳聾相關基因，為深入理解耳聾發生髮展的分子事件，探討新的基因治療方法奠定基礎。

結題摘要

感音神經性耳聾嚴重影響人類的生活質量，其發病的分子機制尚未闡明。本課題組在率先製備了鋅帶蛋白NOB1的單克隆抗體，發現噪聲可誘導NOB1在哺乳動物耳蝸組織表達上調的基礎上，推測NOB1可能通過調控細胞凋亡在耳聾發生髮展中扮演重要角色。 本項目通過構建NOB1的慢病毒干擾載體及腺病毒的NOB1高表達載體，利用基因轉染技術改變NOB1在耳蝸毛細胞中的表達，藉助體內、外實驗研究NOB1在順鉑誘導的耳蝸毛細胞凋亡中的作用，並通過細胞凋亡PCR晶片探索NOB1參與耳蝸毛細胞凋亡的分子機制。本課題的實驗結果表明：①套用順鉑誘導離體培養的耳蝸Corti器發生凋亡，並通過NOB1和DAPI雙重免疫組化染色，觀察到NOB1在凋亡的耳蝸毛細胞中表達明顯增強。② 通過體外培養人腎近曲小管上皮細胞系HK-2來模型模擬內耳毛細胞，利用構建的NOB1慢病毒及腺病毒載體轉染體外培養的HK-2細胞上、下調NOB1的表達，採用流式細胞技術檢測到：過表達NOB1可使HK-2細胞發生凋亡的比率顯著增加，提示NOB1過表達可以誘導細胞凋亡的發生。③ 我們通過大鼠耳蝸中階注射的方法，將NOB1慢病毒載體成功轉染至耳蝸毛細胞，通過RT-PCR及Western blot方法證實NOB1在基因及蛋白水平被抑制，並觀察到下調NOB1可以顯著降低順鉑誘導的耳蝸外毛細胞損傷，以及可以減輕順鉑誘導的大鼠聽力損傷。這一結果證實了NOB1對大鼠藥物性耳聾的發生具有一定的保護作用。④ 通過細胞凋亡PCR晶片篩選到NOB1相關的細胞凋亡基因。結果提示：在大鼠耳蝸內下調NOB1的表達可以使多個凋亡相關基因發生變化，其中下調2倍的基因有9個，分別為Abl1、Akt1、Anxa5、Bcl2l1、Casp12、Cflar、Mapk8ip1、Tnfrsf11b、Tnfrsf1a，證實了NOB1基因的下調可以抑制耳蝸內凋亡基因的表達，從而起到保護聽力及耳蝸毛細胞的作用，但具體的相互作用機制還需進一步探討及相關實驗的完善。 我們順利完成了課題任務，達到預期目標，證明了NOB1是一個新的耳聾相關基因，為基因治療提供了新的靶點，對感音神經性耳聾機制的闡明具有重要意義。