基本介紹
- 中文名：Maxam-Gilbert法
- 外文名：Maxam-Gilbert method
- 套用：DNA序列分析
- 適用：雙鏈和單鏈DNA
- 操作：酶切、凝膠電泳
- 又稱：化學斷裂法
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Maxam-Gilbert法
Maxam-Gilbert的化學斷裂法是DNA序列分析最常用的方法之一，它既適用於雙鏈DNA，也適用於單鏈DNA。它的基本原理是利用幾個具有鹼基專一性的化學切斷反應將單個末端被32P標記的DNA分子進行部分切斷，產生幾組從標記末端到與鹼基專一性反應相應的那種鹼基在DNA中每個位點的長短不同的片段，這幾組片段在凝膠電泳中並排著按鏈長被分開，對凝膠進行放射自顯影後就可以得到代表每個鹼基位置的帶譜，從這個帶譜可以直接讀出從標記末端向另一個末端方向的鹼基序列。
Maxam-Gilbert法研究進展
核酸的一級結構的闡明，對於了解基因的結構、調控和表達有著重要的意義。sanger和Coulson建立的加減法和Maxam和Gilbert建立的化學斷裂法使DNA序列分析技術有了革命性的突破。以後sanger等人又發展了雙脫氧核苷酸末端終止法，M13單鏈噬菌體克隆技術的建立使利用該法測定DNa序列變得更加方便、迅速；Maxam-Gilbert法也有了新的改進。類似的技術已套用於RNA的序列分析。結合限制性內切酶和重組DNA分子克隆技術的套用，核酸的序列分析已成為當前分子生物學中發展最快的領域。核酸序列分析技術已成為許多實驗室的常規技術，大量核酸一級結構的資料正在迅速積累，人們已著手建立核酸序列庫、利用電子計算機來處理這些資料。
Maxam-Gilbert操作方法
由於凝膠電泳解析度的限制，必須將DNA分子用限制性內切酶切割成數百個核苷酸長的片段，從這些片段的序列組建成整個DNA分子的序列。為此必須先建立DNA的限制性內切酶圖譜。
在進行酶圖分析時，通常先測定切點較少的酶的位點，然後再測定切點較多的酶的位點。內切酶切點出現的頻率一般可根據內切酶識別序列的核苷酸長短來估計，即大約每4n個鹼基有一個內切酶切點，n為該種內切酶識別序列的核苷酸數目，如識別6核苷酸序列的內切酶的切點出現頻率大約是每4，096(46)個鹼基有一個。
對於切點較多的內切酶位點，可將這種內切酶酶解DNA後產生的片段，與該種內切酶和已知切點位置的切點較少的內切酶混合酶解後產生的片段比較，從被已知切點位置的內切酶切斷而消失了的片段和新產生的片段的大小來推定該種內切酶的位點。在建立了初步的限制性內切酶圖譜、開始序列分析後，隨著序列結果的積累，還會發現更多的在進一步的序列分析中有用的內切酶切點。
