末端終止法

末端終止法是用來測DNA序列即SANGER雙脫氧鏈終止法。

基本介紹

• 中文名：末端終止法
• 別稱：SANGER雙脫氧鏈終止法
• 適用領域範圍：DNA序列
• 原理：終止於模板鏈的A、C、G或T位置

末端終止法測DNA序列即SANGER雙脫氧鏈終止法,其原理是:

DNA鏈中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯鍵連線，合成DNA所用的底物是 2’-脫氧核苷三磷酸。2’,3’ddNTP與普通dNTP不同，它們在脫氧核糖的3’位置缺少一個羥基。在DNA聚合酶作用下通過三磷酸基團摻入到延伸的DNA鏈中，但由於沒有3’羥基，不能同後續的dNTP形成磷酸二酯鍵，因此，正在延伸的DNA鏈不能繼續延伸。在DNA合成反應混合物的4種普通dNTP中加入少量的一種ddNTP，鏈延伸將與偶然發生但卻十分特異的鏈終止競爭，產物是一系列的核苷酸鏈，其長度取決於引物末端到出現過早鏈終止位置間的距離。在4組獨立酶反應中分別採用4種不同的ddNTP，結果將產生4組寡核苷酸，它們將分別終止於模板鏈的A、C、G或T位置。