MRP4介導膿毒症時血管內皮屏障功能障礙的分子機制研究

《MRP4介導膿毒症時血管內皮屏障功能障礙的分子機制研究》是依託武漢大學，由夏文芳擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：MRP4介導膿毒症時血管內皮屏障功能障礙的分子機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：夏文芳
• 依託單位：武漢大學

項目摘要

膿毒症是臨床危重患者的常見併發症，病情兇險，病死率高。血管內皮屏障功能障礙是膿毒症的重要病理生理表現，其發生機制為細胞內cAMP降低，進而誘導Rac 1失活，導致內皮細胞骨架破壞。多藥耐藥相關蛋白4（MRP4）是主動轉運細胞內cAMP的重要蛋白分子。我們的前期實驗研究發現，膿毒症大鼠肺組織含水量顯著增加，套用MRP4抑制劑MK571明顯減少肺含水量；細胞實驗還顯示，脂多糖刺激引起肺微血管內皮細胞MRP4表達增加，導致細胞內cAMP水平降低。因此，MRP4可能通過調節細胞內cAMP水平，對膿毒症時血管內皮屏障功能產生重要調控作用，但目前國內外尚無MRP4調控膿毒症時血管內皮屏障功能的研究報導。有鑒於此，本研究擬通過動物和細胞實驗研究，探討MRP4在膿毒症時血管內皮屏障功能障礙中的作用及機制，以期發現有效防治膿毒症時血管內皮屏障功能障礙的新靶點。

結題摘要

通過盲腸結紮穿孔（CLP）建立大鼠膿毒症模型分析MRP4對膿毒症時血管內皮屏障功能障礙的調控作用，對雄性SD清潔級大鼠分為假手術組、假手術MRP4抑制劑干預組、膿毒症組和膿毒症MRP4抑制劑組，術後24h麻醉處死後取材。培養大鼠肺微血管內皮細胞，用脂多糖建立細胞模型，並通過重組腺病毒載體Ad-MRP4、Ad-shMRP4轉染細胞來探討MRP4對肺微血管內皮細胞屏障功能的影響和具體作用機制。檢測細胞通透性、細胞骨架形態、PKA活性、cAMP、Rac1、VE-cadherin、β-catenin水平來探討MRP4對肺微血管內皮細胞屏障功能的影響和具體作用機制。動物在體實驗證實膿毒症時MRP4表達顯著上調，動脈血PH值和動脈血氧分壓顯著降低、血清TFN-α、肺組織濕/乾比值增加，而MRP4抑制劑MK571可以使MRP4蛋白表達下調、動脈血PH值和動脈血氧分壓升高、血清TFN-α、肺組織濕/乾比值降低。細胞離體實驗表明MRP4可以使細胞骨架形態改變應力纖維增多，細胞形態改變，降低細胞內cAMP 水平，促使Rac1失活，VE-cadherin、β-catenin水平降低，導致內皮細胞通透性增加。本實驗從動物在體和細胞離體水平傷證實MRP4在膿毒症時血管內皮屏障功能的調控作用和機制，其抑制劑MK571通過下調MRP4表達可明顯改善膿毒症大鼠肺功能，降低炎性因子水平，從而對膿毒症大鼠起到保護作用，為臨床治療MRP4作為膿毒症靶向治療提供了實驗依據。