《MALAT-1 RNA誘導細胞惡性轉化的作用機制研究》是依託四川大學，由宋旭擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：MALAT-1 RNA誘導細胞惡性轉化的作用機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：宋旭
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
逆轉座子在人及小鼠細胞基因組中占42%，大多可轉錄產生大分子非編碼RNA（ncRNA）。我們於2004年證實逆轉座子RNA可通過與PSF蛋白相互作用調節基因表達，從而調控細胞分化及腫瘤發生髮展過程。最近又發現5種來源於人的大分子ncRNA可與PSF蛋白相互作用發揮功能，將正常細胞轉化為腫瘤細胞。MALAT-1 RNA就是其中效應較強的一種。在本項目中，首先鑑定和分析MALAT-1 RNA上的PSF蛋白精確結合位點，發現MALAT-1 RNA通過什麼信息識別PSF蛋白；再鑑定MALAT-1 RNA－PSF蛋白相互作用誘導細胞轉化採用的信號通路；最後將研究信號通路涉及到的關鍵靶基因在腫瘤發生髮展過程中的作用。本項目的完成將使我們能系統深入認識大分子ncRNA誘導細胞惡性轉化的作用機制；確認大分子ncRNA在腫瘤發生髮展過程中的作用，還有助於解釋表觀遺傳學研究中所遇到的一些重大生物學問題。
結題摘要
我們發現MALAT1 RNA中有1個293nt的區域（M1）可以與PSF蛋白相互作用。為驗證M1 RNA與PSF蛋白結合對細胞增殖及腫瘤生成的影響，在小鼠正常成纖維細胞NIH/3T3和人黑色素瘤細胞yusac中過表達M1。通過細胞生長曲線、軟瓊脂集落形成及裸鼠體內成瘤實驗，發現NIH/3T3-M1比對照細胞增殖速度快，發生了惡性轉化並能在軟瓊脂上形成集落和裸鼠體內形成腫瘤；yusac-M1細胞的惡性化程度升高，和對照細胞相比在軟瓊脂上形成更大和更多的集落。採用shRNA方法構建了低表達M1 RNA的穩定細胞株yusac-M1 shRNA，細胞生長曲線、軟瓊脂集落形成實驗表明，yusac-M1 shRNA細胞惡性化程度降低，比對照細胞更慢在軟瓊脂上形成集落。 為了研究與PSF蛋白結合的MALAT-1 lncRNA片段M1 RNA造成細胞惡性轉化的原因，我們進行了染色質免疫共沉澱實驗和半定量RT-PCR實驗，結果顯示M1 RNA能使PSF蛋白從與之結合的原癌基因GAGE6啟動子區解離，M1 RNA高表達能促進GAGE6轉錄；相反地，M1 RNA低表達能抑制GAGE6轉錄。 多聚嘧啶結合蛋白(Polypyrimidine tract binding protein，PTB)可以調控基因可變剪接，影響細胞的發育、分化和癌症產生。已有的研究指出，定位於MALAT-1的RNA片段能與PTB蛋白結合，而PSF蛋白又是PTB蛋白相關剪接因子。為了驗證MALAT-1 RNA、PSF蛋白和PTB蛋白的相互作用關係，我們運用蛋白質免疫共沉澱實方法，證明了內源性PSF蛋白與PTB蛋白的相互作用是靠RNA連線在一起的。通過RNA免疫共沉澱實驗，發現了與PTB蛋白結合的MALAT-1特定序列M3。實驗結果顯示， MALAT-1 RNA上不同位置分別與PSF蛋白和PTB蛋白結合。PSF蛋白通過MALAT-1 RNA的介導調控PTB蛋白控制的RNA可變剪下。目前還沒有任何其它關於蛋白通過ncRNA介導調控另一蛋白控制的RNA可變剪下的報導。 目前已發表2篇SCI論文，另外還有2篇論文（有標註）分別投到Science、JGG。
