LRIG1與人腦膠質瘤化療多藥耐藥性的相關性及機制研究

《LRIG1與人腦膠質瘤化療多藥耐藥性的相關性及機制研究》是依託武漢大學，由陳謙學擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：LRIG1與人腦膠質瘤化療多藥耐藥性的相關性及機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：陳謙學
• 依託單位：武漢大學

項目摘要

多亮氨酸重複區免疫球蛋白樣區1（LRIG1）是近年發現的一種內源性多酪氨酸激酶受體（RTK）抑制劑，而RTK抑制劑可能與化療敏感性有關。我們近期研究中發現人腦室管膜瘤LRIG1的表達與抗氧化物酶、拓撲異構酶（topo II）及原癌基因BCL-2相關。因抗氧化物酶、Topo II、BCL-2均與腫瘤化療耐藥性有關，因而LRIG1極可能與腦膠質瘤化療的耐藥性/敏感性有關。本項目擬建立人腦膠質瘤的依託泊苷（VP-16）和化療新藥替莫唑胺（TMZ）耐藥細胞模型，研究LRIG1與人腦膠質瘤化療耐藥或多藥耐藥性（MDR）的關係，並研究其可能的機制是否為LRIG1負反饋抑制topo II或BCL-2有關。由於RTK抑制劑的研發是當今抗腦膠質瘤治療研究的前沿，本項目有助於促進LRIG1治療腦膠質瘤的臨床研發，並有助於研究聯合套用分子靶向治療和化療治療腦腫瘤的新方法，為膠質瘤的治療開闢新的途徑。

結題摘要

目的：研究多亮氨酸重複區免疫球蛋白樣蛋白1（LRIG1）是否可以提高人腦膠質瘤的化療敏感性及其可能機制。方法：構建布有各級人腦星形膠質細胞瘤標本的組織晶片，免疫組化法研究LRIG1和化療耐藥相關基因的表達相關性。以U251細胞株為親本細胞，採用濃度遞增法誘導建立多藥耐藥細胞株U251/MDR,CCK-8法檢測其多藥耐藥性，將LRIG1質粒轉染進入U251/MDR,CCK-8法檢測其化療敏感性的變化。RT-PCR法檢測U251/MDR中相關耐藥相關基因的表達變化，針對這些表達發生變化的基因，逆轉其表達後檢測細胞化療敏感性的變化。採用脂質體轉染的方法調高或降低化療耐藥相關基因的表達，Western blot檢測另外一些化療耐藥相關基因的表達情況，最終確定LRIG1提高膠質瘤化療敏感性的機制。結果：免疫組化結果顯示LRIG1的表達與MnSOD和BCL-2的表達成負相關；成功建立多藥耐藥細胞株U251/MDR,其對替莫唑胺、環磷醯胺、硫酸長春新鹼、阿黴素和VP-16均有耐藥性，將LRIG1質粒轉染進入U251/MDR後其多藥耐藥性被部分逆轉；RT-PCR結果顯示：LRIG1在耐藥細胞株中表達降低，而BCL-2、topoII、MRP5、MDR1在U251/MDR中的表達上升；將LRIG1質粒轉染進入U251/MDR後，Western blot檢測BCL-2、topoII、GDNF的表達下調，沉默LRIG1後，BCL-2、topoII、GDNF的表達上升。結論：LRIG1可以提高膠質瘤的化療敏感性，其機制可能與LRIG1負反饋抑制BCL-2、topoII、GDNF的表達有關。