基本介紹
- 中文名:HAT選擇性培養基
- 出處:分子生物學
1964年Littlefield首先發明了HAT(H—Hypoxanthine次黃嘌呤,A—Aminopterin氨基蝶呤,T——Thymidine 胸腺嘧啶核苷)培養基的選擇培養。HAT選擇性培養基是根據次黃嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途徑設計的。缺失這兩種酶之一的細胞,在HAT...
HAT選擇法即胸苷激酶基因選擇法,胸苷激酶(Thymidine Kinase,簡稱TK)能催化胸苷(T)轉變成dTMP,進而生成dTTP。TK選擇系統將含有tk+基因的表達載體導入tk-宿主細胞,再用含有次黃嘌呤(H),氨基喋呤(A)和胸苷(T)的培養基培養...
3.選擇性培養 選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞,一般採用HAT選擇性培養基。在HAT培養基中,未融合的小鼠骨髓瘤細胞中DNA的從頭合成途徑會被阻止;未融合的骨髓瘤細胞又因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶(HGPRT),不能利用...
另 7.5%CO2 溫箱,37℃,一周后第一次更換培養液,培養板中預先接種有飼養細胞,加 2× HAT 選擇培養液與原等量培養液混合後,即成為 1×的 HAT 培養基。融合後細胞培養 1.融合後 7~10 天用 HAT 培養液變數換液,以後每隔...
例如在一個哺乳動物細胞的轉化系統中,用取自皰疹病毒(HSV)的胸腺嘧啶核苷激酶(TK)基因DNA去轉化相應的缺陷型細胞TK-,並用HAT培養基來篩選有TK+基因標記的轉化細胞便能成功(見體細胞遺傳學)。在同一轉化系統中,如果把大量沒有...
胸腺嘧啶核苷為生化試劑,用於製備生物培養基,例如HAT選擇性培養基的製備。胸腺嘧啶核苷的原理:在單抗製備中,由於需要進行選擇性殺死非目標細胞,所以使用添加HAT的選擇性培養基,其依據是細胞中的DNA合成有兩條途徑:一條途徑是生物合成途徑(...
雜交瘤單克隆抗體製備技術的基本原理是利用聚乙二醇作為細胞融合劑,使免疫的小鼠脾細胞與具有不斷繁殖能力的小鼠骨髓瘤細胞在體外進行融合,在HAT選擇性培養基的作用下,只讓融合成功的雜交瘤細胞生長,經過反覆的免疫學檢測篩選和單個細胞...
在這一方法中,一個親本細胞株為次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶缺陷型(HGPRT-);另一個親本細胞株為胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型(TK-),在含有次黃嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸腺嘧定核苷(T)的HAT選擇培養液中,上述親本細胞都...