《Fascin-1參與喉鱗癌細胞侵襲運動及轉移的分子機制研究》是依託四川大學，由鄒劍擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Fascin-1參與喉鱗癌細胞侵襲運動及轉移的分子機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：鄒劍
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
癌細胞在疾病早期獲得侵襲運動的能力與其特異性的細胞遷移運動相關基因表達增加有關。本項目在前期研究基礎之上，將繼續著眼於與細胞運動密切相關基因Fascin-1的研究，探索Fascin-1參與侵入性偽足形成並介導喉鱗癌細胞侵襲的分子機制。首先擬建立可調控Fascin-1表達的四環素調控真核表達體系喉鱗癌細胞株，在此基礎上研究Fascin-1表達下調對喉鱗癌細胞骨架結構F-actin以及侵入性偽足形成的影響，並進一步探討Fascin-1表達下調是否導致癌細胞黏附、遷移及侵襲能力降低。重點是明確Fascin-1參與的喉鱗癌細胞侵襲過程與喉軟骨抵抗癌細胞浸潤的屏障作用之間的關係，以及Fascin-1發揮調節喉鱗癌細胞運動能力的功能是否需要PKC結合特性和actin結合特性的共同調控，期望能為喉鱗癌抗侵襲分子機制的研究、抗喉鱗癌轉移治療特異性靶點的選擇以及癌細胞轉移的早期有效預測奠定基礎。
結題摘要
本課題著眼於與細胞運動密切相關基因Fascin-1，研究了Fascin-1 參與侵入性偽足形成並介導喉鱗癌細胞侵襲的分子機制。首先建立了可調控Fascin-1 表達的四環素調控真核表達體系喉鱗癌細胞株，在此基礎上研究了Fascin-1 表達下調對喉鱗癌細胞骨架結構F-actin 以及侵入性偽足形成，以及癌細胞黏附、遷移及侵襲能力的影響。明確了Fascin-1 參與的喉鱗癌細胞侵襲過程與喉軟骨抵抗癌細胞浸潤的屏障作用之間的關係，發現Fascin-1發揮調節喉鱗癌細胞運動能力的功能需要PKC 結合特性和actin 結合特性的共同調控。主要研究成果有：（1）通過建立四環素Tet-on 基因開關調控系統實現在細胞和動物水平對Hep-2 細胞中Fascin-1 基因表達時間和表達水平的“開/關”式調控，結果顯示特異性好，能有效調控Fascin-1的表達。（2）通過F-actin螢光探針檢測Hep-2細胞骨架結構改變，發現抑制Fascin-1蛋白表達的同時破壞了Hep-2細胞骨架結構的完整性。雷射共聚焦顯微鏡觀察結果發現Fascin-1蛋白表達下調導致Hep-2細胞表面絲狀偽足減少，且降低了Hep-2細胞的增殖、黏附、遷移及侵襲的能力。（3）通過在Transwell 侵襲小室模型的基礎上建立半離體實驗模型以及裸鼠體內耳廓皮下移植侵襲模型，模擬喉鱗癌細胞對周圍組織尤其是軟骨組織的侵襲過程證明Fascin-1 表達狀態會影響喉鱗癌Hep-2 細胞對軟骨侵襲的特異性。（4）通過將不受針對內源性Fascin-1 的shRNAs 干擾的Xtfascin-1，及其兩種不同功能突變亞型Xtfascin-1S33A（無PKC 結合特性）和Xtfascin-1S33D（無actin 結合特性）導入Hep-2 細胞，觀察基因功能恢復後癌細胞的運動狀況，實現對PKC和actin 結合特性調控作用的分別研究，從而確定了PKC 和actin 結合特性是Fascin-1 功能發揮的關鍵調控點。
