《EYA4基因抑制肝細胞癌生長的分子機制探討》是依託中山大學，由殷曉煜擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：EYA4基因抑制肝細胞癌生長的分子機制探討
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：殷曉煜
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
我們前期研究發現肝癌組織EYA4基因呈超甲基化，其表達水平與腫瘤大小、術後復發轉移負相關；轉染EYA4能抑制肝癌細胞體外增殖、侵襲和體內生長，提示EYA4是一新的抑癌基因；基因組表達晶片分析示轉染EYA4顯著鑽遷市微下調肝癌細胞中6個基因表達(幅度≥75%)。本項目船重旨在剖析EYA4調控6個目標基因的機制及各基因在EYA4抑癌功能中所起作用。(1)反相蛋白微陣驗證目標基因及其相閥愉符射關信號通路基因的蛋白表達，染色質免疫共沉澱及雙螢光素酶報告系統分析EYA4轉錄調控目標基因機制；(2)蛋白免疫共沉澱及GST-pulldown實驗分析受EYA4磷酸酶活性直接調控的靶蛋白，質譜分析檢測EYA4調控靶蛋白的具體位點，闡明EYA4去磷酸化調控的機制；兵棄囑(3)構建6個目標基因表達載體，體外、體內轉染實驗分析目標基因對肝癌生長的作用。本項目有望證明EYA4是一新抑癌基因並闡明其抑癌機制，為肝癌治療提供新靶點，意義重大。
結題摘要
本研究主要著眼於EYA4在肝癌發生髮展中發揮的作用及其機制。在前期研究中，我們已證明EYA4在肝細胞癌腫瘤中表達水平與肝細胞癌患者預後呈正相關，通過在人肝細胞癌細胞系中過表達及敲低EYA4並進行細胞功能學實驗，證實EYA4可抑制腫瘤細胞的增殖及侵襲，提示乎堡鴉EYA4是一種新的抑癌基因。本課題進行了以下方面研究:（1）我們根據EYA4過表達及敲低的肝細胞癌細胞系的Affymetrix基因組表達譜晶片結果及體內體外實驗，篩選出靶基因RAP1A及MYCBP。（2）通過染色質免疫寒精射共沉澱、雙螢光素酶報告系統、Western blot及蛋白質免疫共沉澱等實驗，顯示EYA4可通過去磷酸化IκBα，抑制IκBα泛素化降解，抑制p65入核，進而抑制NF-κB信號通路，最終抑制NF-κB介導的促進RAP1A轉錄的功能。（3）EYA4還可通過去磷酸化p552-β-catenin，進而抑制MYCBP轉錄發揮抑癌作用。因此，我們認為，EYA4可通過調控NF-κB/RAP1A及β-catenin/MYCBP信號通路在肝細胞癌中發揮抑癌作用。與此同時，本課題組亦藉助本項目所積累的經驗，在肝內膽管細胞癌（ICC）及胰腺導管腺癌（PDAC）中探索EYA4所發揮的作用。（4）在ICC中，通過對臨床樣本的分析及一系列實驗研究，證實ICC腫瘤中EYA4表達水平與ICC患者臨床預後呈正相關，並在人ICC細胞系及裸鼠體內成瘤實驗中證實EYA4可抑制ICC腫瘤細胞的增殖及侵襲。（5）在PDAC中，我們發現PDAC患者腫瘤中EYA4表達水平與PDAC患者臨床預後呈正相關，並且證實EYA4通過調控β-Catenin/ID2信號通路發揮抑制PDAC的作用。綜上所述，在本項目中，我們主要證實了在肝細胞癌中EYA4與患者臨床預後相關，可通過調控NF-κB/RAP1A及β-catenin/MYCBP信號通路發揮其抑癌作用。同時，在肝內膽管細胞癌及胰腺導管腺癌中，我們亦證實EYA4作為抑癌基因發揮享朽棵作用，為腫瘤治療提供新靶點。
