E花環實驗

這是一種體外檢測人和動物細胞免疫功能的方法，常用於T淋巴細胞計數。

基本介紹

• 中文名：E花環實驗
• 作用：檢測T細胞數量
• 試驗溫度：16～23℃
• 套用：外周血T細胞數量、功能的檢測

原理

免疫學上用來檢測T細胞數量的一種實驗方法，T細胞表面具有能與綿羊紅細胞（SRBC）表面糖肽結合的受體，稱為E受體（CD2）。CD2 是一種糖蛋白，相對分子質量為30 000～60 000，已證實E受體是人類T細胞所特有的表面標誌。當T細胞與SRBC混合後，SRBC便粘附於T細胞表面，呈現花環狀。通過花環形成檢查T細胞的方法，稱為E花環形成試驗。根據花環形成的多少，可測知T細胞的數目，從而間接了解機體細胞免疫功能狀態，判斷疾病的預後，考核藥物療效等。

操作方法

1．用分層液密度梯度離心法分離淋巴細胞，計數後，用Hanks液配成107個/ml細胞懸液。

2．取0.1 ml淋巴細胞懸液，加入0.1 ml 1% SRBC及0.05 ml滅活小牛血清，混勻。

3．37℃靜置5分鐘，500 rpm低速離心5min後，放入冰櫃，2小時或過夜。

4．取出試管，吸棄上清液，加0.8%戊二醛溶液1 滴，輕輕旋轉混勻，置4℃冰櫃固定15分鐘。

5．取出後，輕輕旋轉試管，使沉澱細胞重新懸浮；取1滴塗片，自然乾燥後，瑞氏染色，高倍下觀察。

結果判斷

凡能結合3個SRBC者即為E花環陽性細胞。計數200個淋巴細胞，算出花環形成細胞百分率。

注意事項

1．SRBC最好是新鮮的，一般採血後保存在Alsever保存液中，2周內可以用，超過2周SRBC與淋巴細胞的結合能力下降。

2．從採血到測定，不得超過4小時，若用分離的淋巴細胞，放置時間也不得超過4小時，否則SRBC受體會自行脫落。同時用錐蟲藍檢查活力，活細胞不少於95%。

3．計數前應將沉於管底的細胞予以重懸，但只宜輕緩旋轉試管，使細胞團塊鬆開即可，不能過猛或強力吹打，否則花環會消失或減少。

4．要求全部試驗在室溫（16～23℃）中進行。

實驗材料

1．肝素抗凝血2 ml。

2．聚蔗糖-泛影葡胺分層液。

3．pH7.2～7.4 Hanks液。

4．瑞氏染色液。

5．0.8%戊二醛溶液（用Hanks液將戊二醛配成0.8%，然後用1 mol/L NaOH將pH調至7.2～7.4）。

6．吸收滅活的小牛血清（小牛血清經56℃ 30分鐘滅活後，取1體積壓積SRBC，加2體積滅活小牛血清，混勻後置37℃ 30分鐘，離心沉澱紅細胞，吸取上清，放4℃冰櫃保存備用）。

7．1% SRBC懸液（無菌脫纖維的綿羊靜脈血100 ml加Alsever保存液50 ml，置4℃冰櫃保存，一般不宜超過2周。用前以Hanks液洗3次，1 500轉/分 10分鐘，棄上清，將壓積紅細胞用Hanks液配成1 %SRBC懸液，細胞濃度約為8×107個/ml）。

套用

可用於外周血T細胞數量、功能的檢測及T細胞的分離。