DNaseI足跡實驗

DNase I足跡試驗是一種鑑別RNA聚合酶等蛋白質在DNA上結合位點的方法，它不僅能找到與特異性DNA結合的目標蛋白，而且能告知目標蛋白結合在哪些鹼基部位。足跡試驗的方法較多，常用的有DNase I足跡試驗和硫酸二甲酯足跡試驗(dimethylsulfate，DMS)，兩者原理基本相同。

基本介紹

• 中文名：DNase I足跡實驗
• 外文名：Dnase I footprinting assay
• 鑑別：RNA聚合酶等蛋白質
• 常用方法：DNase I足跡試驗
• 特點：定位精確，使用廣泛

蛋白質結合在DNA片段上，能保護結合部位不被DNase破壞，DNA分子經酶切作用後遺留下該片段(亦稱“足跡”)，進而可以確定它的序列。在電泳凝膠的放射性自顯影圖片上，相應於蛋白質結合的部位沒有放射性標記條帶。

DNase I足跡試驗的實驗流程如下：①待檢雙鏈DNA分子用P作末端標記，通常只標記一端；②蛋白質與DNA混合，等兩者結合後，加入適量的DNase I，消化DNA分子，控制酶的用量，使之達到每個DNA分子只發生一次磷酸二酯鍵斷裂，並列設定未加蛋白質的對照；③從DNA上除去蛋白質，將變性的DNA加樣在測序凝膠中作電泳和放射性自顯影，與對照組相比後解讀出足跡部位的核苷酸序列。

足跡試驗特異性好，定位精確，使用廣泛。