DNA連線技術是指利用DNA連線酶把載體DNA和要克隆的目的DNA片段連線在一起，成為一個完整的重組分子。
基本介紹
- 中文名：DNA連線技術
- 原理：利用DNA連線酶把載體DNA
- 操作：取3支eppendorf離心管
- 器材：恆溫水浴器
[原理],[操作],[試劑與器材],
[原理]
當載體DNA和外源DNA末端都是由一種產生粘性末端的內切酶切割產生的話（同尾酶也可以），或者兩者末端被接上一段互補的多聚體的尾巴，那么經退火後可形成新的重組分子。連線後產生的重組分子中仍然保留著外源DNA兩端的限制性內切酶切點，從而使我們能方便地從重組分子再次取出所克隆的DNa段。
[操作]
（1）取 3支eppendorf離心管，標上1、2、3號。
（2）按下表依次加水、V-DNA，在 2，3號管加 P-DNA。
（3）離心3秒，置 65℃保溫 10分鐘，然後取出插入冰中。
（4）用T4 DNA連線酶稀釋液把T4 DNA連線酶稀釋至0.2 U/ml。
（5）按表中所示的量加入10×緩衝液，在1及3中加連線酶。
（6）混勻，離心3秒鐘，置12℃恆溫水浴過夜。次日取出，如不做轉染放-20℃保存。2和1為對照，以檢查V-DNA的酶切效果和連線酶連線效果。
現在寶靈曼公司已推出快速連結DNA試劑盒。該試劑盒能在室溫下5分鐘內將粘性末端或平頭末端片段連線。進行反應需要的所有試劑已包括在試劑盒內。
[試劑與器材]
l．試劑
（l）載體DNA(V-DNA): M12mp19RF DNA，經BamHI切割,分子量約7.2kb，濃度約lμl=10 ng。
（2）外源DNA(P-DNA): AcNPV變株m29DNA的BamHI切割產生的F片段，分子量約1.9 kb，濃度1μl=5ng。
（3）10×連線反應液：700 mmol/L Tris-HCl，pH7.5，70mmol/L MgCl2，0.7mmol/L ATP。
（4）T4 DNA連線酶稀釋液：50mmol/L Tris-Cl，pH7.5，500μg/ml BSA（牛血清白蛋白）。
2. 器材 恆溫水浴器。
