DNA甲基化檢測

DNA甲基化是基因表達調控的一種重要機制，DNA甲基化檢測是指利用各種方法對腫瘤細胞DNA甲基化程度進行測定。在惡性腫瘤的發展中，甲基化的狀態並不是一成不變，腫瘤細胞內全基因組的低甲基化程度與疾病進展、腫瘤大小和惡性程度都有密切的關係，DNA甲基化檢測對腫瘤惡性程度的判斷有重要意義。

基本介紹

• 中文名：DNA甲基化檢測
• 臨床意義：可用於腫瘤的預測

檢查前準備

1.向被檢測者解釋本操作的目的、方法等，消除顧慮。
2.選取血液、其他體液或細胞進行檢測，如需要進行有創傷的操作則需要提前完善凝血功能測定等相關檢查。

操作方法

1.基因組DNA的提取及濃度測定，設計引物時要求所擴增的片段中必須含有一個或一個以上的CpG島，以保證檢測可以正常進行。
2.基因組DNA進行化學修飾，主要採用亞硫酸氫鈉修飾，注意溫度和時問的掌握，修飾後的DNA單鏈比較脆弱，操作應輕柔，避免劇烈振盪。適當增加亞硫酸氫鈉的濃度，同時適當減少基因組DNA的量可防止假陽性的出現。
3.以修飾後的基因組DNA為模板，分別用甲基化引物和非甲基化引物進行PCR擴增，可選用熱啟動酶或者採用降落PCR等方法提高PCR擴增的特異性。
4.將PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳或聚丙烯醯胺凝膠電泳以判斷結果。

結果分析

在進行甲基化和非甲基化PCR擴增時，均設立空白對照和陽性對照。如果只擴增出非甲基化條帶，判斷為非甲基化；相反，如果只擴增出甲基化條帶，則判斷為甲基化；如果既能擴增出甲基化條帶又能擴增出非甲基化條帶，說明是半甲基化狀態，在統計結果時也計為甲基化陽性。腫瘤細胞DNA總體甲基化的程度越低，癌症的惡性程度也就越大。

臨床意義

在腫瘤的發生髮展過程中，由於CpG島的局部高度甲基化要早於細胞惡性增生，故其甲基化的檢測可用於腫瘤的預測，而全基因組水平的低水平甲基化狀態，則隨著腫瘤惡性程度的增加而進一步降低，使其可用於腫瘤的診斷以及分級。此外，除了在腫瘤組織中檢測甲基化以外，大量研究通過對腫瘤患者血清及其他體液中的腫瘤細胞的DNA甲基化檢測輔助診斷腫瘤及判斷預後，包括肺癌患者痰及支氣管灌洗液、乳腺癌患者的乳頭抽吸物、結直腸癌患者的糞便、膀胱癌和前列腺癌患者的尿液及腫瘤患者的血漿及血清等。所以甲基化可以作為一個比較理想的腫瘤早期診斷的生物標誌物和預後評估指標，對腫瘤的篩查和風險評估、早期診斷、分期分型、預後判斷及治療監測都具有重要的意義。