《ANCA相關血管炎中mCRP放大中性粒細胞致病性活化的機制》是依託天津醫科大學，由徐鵬程擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：ANCA相關血管炎中mCRP放大中性粒細胞致病性活化的機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：徐鵬程
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）誘導中性粒細胞損傷血管內皮是ANCA相關血管炎（AAV）的病因，但既往研究表明中性粒細胞對內皮細胞的損傷依賴活化血小板的存在。AAV患者血中五聚體C反應蛋白（pCRP）明顯升高。課題組近期發表的文章證明，ANCA可通過中性粒細胞誘捕網使pCRP解聚為單體（mCRP），mCRP可活化血小板並釋放中性粒細胞激活因子HMGB-1，提示mCRP可以血小板為橋樑輔助ANCA誘導中性粒細胞的活化。初步證明這種作用是由mCRP通過aa35-47與血小板脂筏結合而實現的。本研究擬通過基因重組aa35-47突變mCRP研究mCRP與血小板脂筏結合特性及信號通路；利用流體小室、雷射共聚焦及活體成像等技術研究mCRP活化的血小板對ANCA誘導中性粒細胞損傷血管內皮的影響；觀察mCRP生成抑制劑1,6-bis(PC)-H對AAV模型大鼠的腎保護作用，為探索AAV發病機制提供新思路。
結題摘要
AAV發病機制複雜，ANCA可激活中性粒細胞釋放多種炎症因子，但炎症水平與病情的嚴重程度並非嚴格相關。我們的研究發現AAV患者尿中mtDNA的水平明顯增高，並且和腎臟損傷的嚴重程度有關。向富血小板血漿中加入激活劑可以激活血小板並促進游離mtDNA的釋放，體系中加入mCRP可以增加血小板的激活及游離mtDNA的釋放水平。PLA2抑制劑可以抑制游離mtDNA的釋放。pCRP也可以增加已激活的血小板釋放游離mtDNA，加入pCRP解離抑制劑1,6-bis(PC)可以抑制pCRP的作用但不能抑制mCRP的作用，加入脂筏破壞劑或是識別CRP35-47的抗體可以抑制mCRP的作用，加入NF-κB 通路抑制劑 Bay11-7082明顯抑制mCRP的作用。將mCRP作用後的血小板上清與ANCA刺激的中性粒細胞共孵育可以增強中性粒細胞的激活及NETs釋放水平，使用PLA2抑制劑預處理或是加入TLR9受體抑制劑可以減弱這種作用。因此AAV時mCRP可以刺激血小板釋放mtDNA從而增強ANCA對中性粒細胞的激活。這種作用主要依賴於mCRP通過胺基酸35-47結合到血小板脂筏微區並激活NF-κB 通路使血小板激活並釋放線粒體。補體旁路途徑活化在AAV至關重要的作用，我們提取中性粒細胞並用ANCA激活，製作小鼠MPO-ANCA血管炎模型並注射CRP，觀察CRP對小鼠病情的影響。腎活檢病理顯示CRP可解離單體形式，mCRP在腎小球及小管部位沉積，並與H因子呈部分共定位沉積，分離正常人中性粒細胞經ANCA刺激後，發現上清中存在高水平CRP時上清中炎症因子IL-8水平更高，但補體活化產物C5b-p水平更低，檢測mCRP的沉積與H因子的沉積共定位。體外培養人臍靜脈內皮細胞，經NETs刺激後誘導臍靜脈內皮細胞凋亡，發現上清中存在高水平CRP時有更多H因子與mCRP共定位沉積。體外實驗證實人mCRO可與小鼠H因子結合，製作小鼠MPO-ANCA血管炎模型，同時注射人mCRP的干預組較未干預組外周血炎症因子IL-8水平更高，但蛋白尿及血尿素氮水平更低，腎小球可見mCRP與H因子共沉積。同時注射CRP解離抑制劑可以部分抵消CRP的作用。因此AAV時高水平血清CRP可以輔助ANCA刺激中性粒細胞，增加炎症水平，但同時CRP解離為mCRP沉積後可以結合更多的H因子，抑制了補體旁路途徑的激活。
