《ANCA誘導的ROS在調控中性粒細胞凋亡∕NETosis轉換中的作用機制》是依託天津醫科大學，由徐鵬程擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：ANCA誘導的ROS在調控中性粒細胞凋亡∕NETosis轉換中的作用機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：徐鵬程
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）是ANCA相關小血管炎（AAV）的標誌抗體，可以誘導中性粒細胞產生活性氧（ROS）。NETosis發現於2004年，指中性粒細胞釋放出由胞內DNA及各種酶組成的胞外網（NETs），進而發生死亡的現象。NETs對機體具有很強的損傷性，ANCA可以誘導NETs形成。課題組前期研究表明，ANCA是否誘導NETosis依賴於ROS的水平，低水平ROS僅誘導細胞凋亡，高水平ROS則可誘導NETosis。故ROS可能在中性粒細胞從凋亡到NETosis的轉換中起關鍵作用。本研究擬在此基礎上採用流式細胞術測定凋亡，利用定量測定DNA檢測NETs生成等方法，進一步研究ANCA刺激中性粒細胞時ROS在調控凋亡∕NETosis中的作用及信號通路，明確中性粒細胞凋亡與NETosis之間的關係，並抑制NETosis使細胞向凋亡轉化，為從新的角度探究AAV的發病機制及治療提供理論基礎。
結題摘要
中性粒細胞胞外誘捕網（NETs）在ANCA相關性血管炎（AAV）的發病中具有重要作用，我們對NETs在AAV血栓形成中的作用機制進行了研究，並重點對NETs與活動期ANCA相關血管炎重要的血清標誌物C反應蛋白（CRP）共同作用機制進行了研究。從正常人外周血分離中性粒細胞，用含有ANCA的IgG刺激細胞產生NETs並將細胞包被在固相載體，利用含CRP的富血小板血漿進行灌注。結果發現netting中性粒細胞可在剪下力作用下使血小板沉積並活化，並且使五聚體CRP（pCRP）沉積在活化血小板上並轉化為單體CRP（mCRP），mCRP可引起更多的血小板活化，mCRP還可增強灌注實驗中血漿D-二聚體的形成，同時增強血小板分泌炎症因子HMGB-1。說明剪下力作用下血小板可沉積在ANCA刺激的netting中性粒細胞上並發生激活，同時循環中的pCRP沉積在激活的血小板上並解離為mCRP，從而進一步激活血小板及凝血系統，提示NETs促使了ANCA相關血管炎患者血栓事件的發生，而高水平的CRP可能通過轉化為mCRP而進一步加強這種作用。ANCA結合到中性粒細胞引起後者的活化是AAV的核心致病機制，為進一步探討ANCA對中性粒細胞NETs生成的關係，我們對血液中重要的負性炎症標誌物--白蛋白（Albumin，ALB）在ANCA刺激中性粒細胞活化過程中的所發揮的作用進行了研究。我們收集了74名抗MPO抗體陽性AAV患者臨床資料，發現血清ALB與CRP呈顯著負相關性（R=-0.536, P＜0.001）。為了證明AAV中ALB對炎症的抑制作用是通過抑制ANCA刺激中性粒細胞NETs產生而實現的，我們研究了在不同濃度的ALB的條件下ANCA刺激中性粒細胞產生NETs能力的變化，發現從AAV患者獲取的中性粒細胞較正常人對ANCA刺激NETs生成的作用更加敏感，隨著ALB濃度的增加，ANCA刺激中性粒細胞NETs的產生受到抑制，在ALB濃度為20g/L和40g/L時ANCA刺激中性粒細胞產生的ROS水平具有明顯差異（P＜0.05）。我們同時發現中性粒細胞產生NETs水平也有顯著性差異（P＜0.05），同時發現ANCA的親和力對此過程具有影響，親和力強的ANCA受ALB封閉作用的影響較小，而親和力低的ANCA受ALB封閉作用的影響更大，進一步證明了NETs在AAV的發病機制中具有重要作用。
