731部隊城子溝實驗場距731部隊西南5公里，面積10萬平方米，四周圍有土牆。這裡是遼金古城址，俗稱“金兀朮馬圈”。731部隊侵占平房後，把城子溝設為野外實驗場。
據當地村民回憶，1941-1945年，日本人多次在城子溝進行細菌或毒氣實驗，土城中間有幾十米高的木架子，上面插滿紅旗，為細菌實驗的標誌。土城周圍設有日本哨崗，每次實驗時，周圍村屯全部戒嚴。村民們看見過日本人整汽車的往實驗場運送過馬、牛、羊、老鼠等動物。將這些被實驗的動物固定在木架子周圍，日本的飛機在城子溝200米左右的高度對準紅旗投擲細菌陶瓷炸彈，而後，實驗人員去檢查實驗結果。附近村民在野甸子上經常看到燒焦的草和動物屍體。
