《53BP1與E1F1相互作用的分子機制及功能研究》是賈弘禔為項目負責人，北京大學為依託單位的面上項目。
基本介紹
- 中文名：53BP1與E1F1相互作用的分子機制及功能研究
- 項目類別 ：面上項目
- 項目負責人：賈弘禔
- 依託單位 ：北京大學
結題摘要,項目摘要,
結題摘要
本項目通過抑癌基因p53(TP53)結合蛋白1——53BP1與E2F1相互作用及其對E2F1功能的調節，探索53BP1、E2F1在DNA損傷應激中的新功能。53BP1、E2F1表達動力學分析揭示，DNA損傷可刺激E2F1蛋白表達上調，但53BP1表達卻沒有變化，而是發生了核轉位。GST Pull-down證明，53BP1與E2F1可發生（體外）相互作用，採用CoIP偶爾檢測到53BP1-E2F1相互作用（即偶現重複性），但採用顏色共定位（color co-localization）檢測到DNA損傷時有E2F1核仁轉位，但53BP1主要分布在核質。上述結果提示，DNA損傷時53BP1與E2F1分布在不同的細胞區間。鑒於此，以及TP53與53BP1一樣均為E2F1相互作用蛋白，我們在2010年《進展》報告中修正了年度計畫，增加了DNA損傷時E2F1與TP53等相關蛋白的相互作用及其對E2F1轉錄功能的影響。主要發現和結果如下。 （1）TP53與E2F1相互作用、形成p53-E2F-PLK1啟動子複合物，抑制PLK1基因激活：既往研究證明p53、E2F1通過相互作用可抑制對方DNA結合活性，抑制彼此的轉錄。但我們發現p53通過p53-E2F--DNA複合物抑制E2F1依賴的PLK1基因轉錄激活，為p53調節E2F1在細胞周期中的功能及p53介導的G2/M阻滯提出了新的解釋。相關工作已經總結、投送《核酸研究》。 （2）p14ARF與E2F1相互作用、形成p14ARF-E2F/partner-DNA複合物，抑制E2F1靶基因激活：ARF通過與E2F1相互作用，形成p14ARF-E2F/partner-DNA超（級）複合物，抑制包括ARF在內的E2F1靶基因轉錄。這樣，ARF抑制E2F1轉錄與E2F1激活ARF兩個相對的基因表達通路共同組成反饋環路，協調調節細胞增殖和凋亡。相關工作已經發表。 （3）DNA損傷引起E2F1核轉位依賴ATM。（4）DNA損傷引起Cdc4B-CDH1-SKP2介導的E2F1失調引起中心體擴增及多倍體發生。 本項目已發表項目批准號標註SCI論文4篇，已投稿1篇，投稿中2篇；培養博士生3名，碩士生1名。
項目摘要
p53結合蛋白（53BP1）是一種DNA雙鏈斷裂修復的感受/效應分子，維持基因組穩定性。E2F1是一種轉錄因子，可正、負性調節細胞生長，也是一種重要的DNA損傷修覆信號通路的調控分子。研究證明，拓撲異構酶結合蛋白I可通過BRCT結構域結合E2F1。鑒於53BP1含有BRCT、Tudor結構域，所以我們提出假說：53BP1可通過這些結構域結合E2F1；通過這種相互作用，53BP1負性調節E2F1轉錄因子活性，抑制細胞周期調節蛋白表達，阻止細胞周期進程；二者共同被招募到坍塌的複製叉，阻止DNA複製，促進DNA損傷修復，維持基因組穩定性。本項目擬以正常和腫瘤細胞係為對象，採用分子細胞生物學原理與技術，研究53BP1-E2F1相互作用及其分子機制，探索DNA損傷應激條件下這種相互作用的生物學功能，驗證假說，提出53BP1、E2F1在DNA損傷修復、細胞檢驗點信號調節中發揮作用的新功能、新模式。
