體外培養的原理與技術

《體外培養的原理與技術》是2001年2月由科學出版社出版的圖書，作者是薛慶善。本書主要從植物體的整體、器官、組織和細胞幾個層次上介紹常見的、重要的植物種類的培養技術與套用技術。

基本介紹

• 書名：體外培養的原理與技術
• 作者：薛慶善 著
• 出版社：科學出版社
• 出版時間：2001年2月出版

基本信息

語種：中文

標準書號：7-03-008125-0

裝幀：精裝

版本：第一版

開本：16開

責任編輯：

字數：1777千字

頁數：1200

書類：理論專著/研究生教育

冊/包：2

編輯部：生物出版分社

內容簡介

本書包括五個部分。第一部分“體外培養的基本原理與技術”集中介紹細胞培養、組織培養及器官培養的基本概念、基本原理和基本技術等基礎性內容。第二部分“動物基本組織的體外培養”圍繞上皮組織、結締組織、肌肉組織和神經組織四大基本組織，對各種細胞的體外培養原理與技術分別進行介紹。第三部分“特殊類動物細胞的體外培養”著重介紹動物腫瘤細胞、病原微生物、醫學寄生蟲以及無脊椎動物細胞的培養原理與技術。第四部分“體外培養技術的套用”主要介紹一些同體外培養技術非常密切有關的套用技術，如細胞分化與體外誘導分化、細胞融合技術、體外受精技術、基因轉染技術、雜交瘤技術等，以及動物細胞大規模培養的原理與技術。第五部分“植物組織細胞的培養”除了簡要介紹植物組織細胞培養的基本原理與技術之外，

本書在內容設定上既適合初次學習和套用體外培養技術的廣大青年科技工作者、研究生或者臨床醫生等人員一般層次的需要，同時又能滿足特殊科學研究領域的研究人員以及相關生產領域的工作人員等較深層次的要求，對體外培養技術領域的高級學者也有參考價值。有泛有專，經典理論與現代進展兼門套用並重。廣泛適應於從事生物學、醫學、生物製藥、農林業以及環境檢測等領域的各類人員之需要。

目錄

前言

緒論

一、體外培養的概念

二、體外培養技術的發展歷史

(一)體外培養技術的創立

(二)體外培養技術的發展

(三)我國體外培養工作的發展情況

三、體外培養技術的主要類別

四、體外培養技術的套用

(一)在組織學與胚胎學以及細胞生物學領域的套用

(二)在腫瘤學方面的套用

(三)在微生物學領域的套用

(四)在免疫學方面的套用

(五)在藥理學領域的套用

(六)動物細胞與微生物大規模培養技術在生產實踐上的套用

(七)在現代醫學領域的套用

(八)植物組織細胞培養技術的套用

五、對體外培養技術的評價

第一部分體外培養的基本原理與技術

第一章從體內生存環境到體外生長條件

第一節體內細胞生存的營養條件

一、水

二、無機鹽類

三、葡萄糖

四、維生素

五、胺基酸

第二節體內細胞生存的其它條件

一、溫度

二、氧和酸鹼度

三、體液滲透壓

四、細胞之間的相互聯繫

第三節體外生長大環境

一、體外培養實驗室

二、體外培養的設備和器具

(一)大型設備和儀器

(二)培養器具

第四節培養用液

一、水與平衡鹽溶液

(一)水與緩衝液

(二)生理鹽水與平衡鹽溶液

二、培養液

(一)天然培養基

(二)合成培養基

(三)無血清培養基

三、體外培養的其它常用液

(一)其它常用液的類型

(二)其它常用液的配製

第五節細胞在體外生長的其它條件

一、無污染的氣、液相環境

二、溫度

三、生長基質

第六節清洗和消毒

一、培養用具的清洗

(一)玻璃器皿的清洗

(二)膠塞和塑膠用品的清洗

(三)清洗後物品的包裝

二、培養用品的消毒和滅菌

(一)物理方法

(二)化學方法消毒

第二章體外培養的基本方法和過程

第一節原代培養

一、原代培養的過程

(一)取材及培養材料的製備

(二)分離(散)細胞的方法

(三)接種與培養過程

(四)更換培養液

二、原代細胞培養方法的注意事項

第二節繼代培養

一、原代培養物需要傳代的指標

二、傳代的過程

三、傳代培養的注意事項

第三節體外培養的基本方法和技術

一、懸滴培養法

(一)Maximow雙蓋片懸滴培養法

(二)改良的植塊懸滴培養法

二、培養瓶培養法

三、蓋玻片培養法

四、旋轉管培養法

五、灌注小室培養法

六、培養板培養法

七、二倍體細胞培養法

八、克隆培養法

九、中空纖維細胞培養技術

十、微載體細胞培養法

十一、微囊培養技術

第四節培養物的凍存與復甦

一、培養物的冷凍保存與復甦原理

(一)冷凍速率

(二)冷凍保存溫度

(三)復溫速率

(四)冷凍保護劑

二、冷凍保存方法

(一)非玻璃化凍存方法

(二)玻璃化凍存方法

三、凍存細胞的復甦

(一)非玻璃化凍存細胞的復甦方法

(二)玻璃化凍存細胞的復甦方法

第五節培養物的污染

一、微生物污染的判斷

(一)細菌的污染及其判斷

(二)真菌的污染及其判斷

(三)支原體的污染及其判斷

(四)病毒的污染及其判斷

二、污染的預防

三、污染的排除

第三章體外培養物的生長生物學

第一節體外細胞培養物的生長類型

一、黏附型細胞

(一)上皮型細胞

(二)成纖維細胞型細胞

(三)遊走型細胞

(四)多形型細胞

二、懸浮型細胞

第二節體外培養物的細胞生物學特點

一、培養細胞分化狀態的變化

二、培養細胞的增殖能力

三、體外培養細胞的生長過程

(一)原代培養期

(二)傳代培養期

(三)衰退期

四、體外培養細胞的形態學

五、植塊培養物的生長生物學

第三節影響動物細胞體外生長的因素

一、營養成分與生長基質成分對細胞生長的影響

(一)血清的成分與作用

(二)無血清培養液的設計及套用

(三)生長基質成分

二、溫度條件對細胞生長的影響

三、氣相環境對細胞生長的影響

四、培養液的酸鹼度對細胞生長的影響

五、輻射線對細胞生長的影響

六、超音波對細胞生長的影響

七、影響細胞生長的其它因素

第四章細胞分離與純化

第一節解離(散)組織製備細胞懸液過程中的細胞分離

第二節利用細胞體積和密度進行分離純化的方法

一、一步密度梯度離心法

(一)血細胞的分離

(二)玫瑰花環細胞的分離

二、等密度梯度離心法

(一)連續BSA密度梯度離心法

(二)非連續BSA密度梯度離心法

(三)連續Percoll密度梯度離心法

(四)非連續Percoll密度梯度離心法

三、速度沉降法

(一)低速離心速度沉降法

(二)簡單策略沉降法

(三)簡單重力沉降法分離白細胞與紅細胞

(四)簡單重力沉降法分離粒細胞

四、離心淘析分離技術

第三節根據細胞表面電荷的細胞分離方法

一、自由流動電泳分離技術

二、密度梯度電泳分離技術

第四節基於不同黏附特性的細胞分離方法

一、差速黏附處理

二、葡聚糖凝膠G?10過柱法

三、羰基鐵粉法

四、尼龍毛分離法

第五節利用細胞表面標誌分離純化細胞的方法

一、免疫溶解法

二、盤化法

(一)直接法

(二)間接法

三、凝集素凝集法

(一)花生凝集素凝集法分離皮、髓質胸腺細胞

(二)大豆凝集素凝集法分離T、B淋巴細胞

四、玫瑰花環分離法

(一)E玫瑰花環分離法

(二)EA玫瑰花環分離法

(三)EAC玫瑰花環分離法

五、流式細胞分選術

(一)流式細胞儀的結構和工作原理

(二)流式細胞術分選細胞

六、免疫磁珠分離技術

第六節利用其它細胞學特性分離純化細胞的方法

一、反覆植塊法

二、有絲分裂抑制劑處理

第五章細胞系(株)、細胞克隆與細胞周期同步化

第一節細胞系(株)的建立與鑑定

一、基本概念

二、建立細胞系(株)的檔案

三、細胞系的鑑定

(一)細胞系鑑定的內容

(二)細胞系形態學的鑑定方法

(三)細胞系的染色體數目、核型及其帶譜分析

(四)細胞系的同工酶酶譜檢測

四、細胞系(株)的保藏

五、國內部分已建立的細胞系或株名錄

六、國內部分已建立的單克隆抗體雜交瘤系或株名錄

七、國外部分已建立的細胞系或株名錄

第二節細胞克隆

一、克隆培養技術

(一)稀釋鋪板法

(二)飼養層克隆法

(三)膠原膜板或血纖維蛋白膜層板克隆法

(四)瓊脂克隆法

(五)在瓊脂基底上用甲基纖維素克隆化

二、影響克隆形成率的因素

三、克隆的分離

第三節細胞周期與細胞同步化

一、細胞周期

二、細胞同步化

(一)各期細胞的分離

(二)細胞分裂相同步化法

第六章器官培養

第一節器官培養技術概論

一、器官培養技術的基本要點

二、器官培養技術的發展簡史

三、器官培養的基本原則

(一)養分的供應與取材

(二)抑制細胞遷移

四、對器官培養技術的評價

五、培養器官的生存環境及影響因素

(一)培養器官的生存條件及其影響

(二)培養器官的內在因素及其影響

第二節器官培養的基本方法

一、表玻璃器官培養法

二、瓊脂凝膠培養法(Wolff器官培養法)

三、懸浮培養法

四、直接漂浮培養法

五、擦鏡紙培養法

六、金屬格柵器官培養法

七、瓊脂小島器官培養法

八、陳氏濾紙虹吸器官培養法

九、灌注式器官培養法

十、旋轉管培養法

十一、搖擺式器官培養法

十二、器官灌注系統

十三、雞胚尿囊絨膜培養法

十四、早期雞胚胚盤培養法

第三節器官培養各論

一、胚胎肢芽的器官培養

(一)胚胎肢芽的血漿凝塊器官培養方法

(二)胚胎肢芽的瓊脂凝膠培養法

二、胚胎性腺的器官培養

三、軟骨與骨的器官培養

(一)軟骨的器官培養

(二)骨的器官培養

四、神經組織的器官培養

五、牙胚的器官培養

(一)Trowell培養法培養牙胚器官

(二)懸浮培養法培養牙胚器官

六、齶板的器官培養

(一)齶板器官的靜式培養法

(二)齶板器官的轉動培養法

七、毛囊的器官培養

八、血管的器官培養

(一)血管的懸浮孵育法器官培養

(二)血管的瓊脂孔器官培養法

九、肝臟的器官培養

十、小梁網的器官培養

十一、人胃腸黏膜的器官培養

十二、胚胎器官的上皮與間充質植塊的聯合培養

十三、腫瘤侵襲研究中的器官培養

(一)腫瘤細胞與靶器官植塊的製備

(二)腫瘤細胞與器官植塊幾種聯合培養模型

第四節全胚胎培養

一、植入前胚胎培養

二、植入後胚胎培養

第五節器官培養的套用

一、器官培養中的形態發生研究

二、器官培養與發育分化研究

(一)外分泌腺的發育分化

(二)內分泌腺的發育分化

(三)性腺及前列腺的發育分化

(四)神經組織的發育分化

(五)各組織細胞間的相互作用對器官分化的影響

三、體外培養整個胚胎的生長發育

四、胚胎致畸作用研究

五、器官的功能及其代謝研究

六、器官移植中的套用

(一)器官保存

(二)降低免疫原性

七、器官培養與腫瘤侵襲研究

第七章培養物的觀察檢測方法

第一節活細胞的觀察檢測方法

一、相差顯微鏡觀察培養物的形態結構

(一)相差顯微鏡

(二)用相差顯微鏡觀察活細胞的方法

(三)活細胞的動態觀察與縮時電影

二、細胞計數法

三、細胞生長曲線

四、體外活體染色觀察與活體染料

五、活細胞的染料排除檢測法

六、細胞增殖活性測定的3H?TdR摻入法

七、細胞活力測定的MTT比色法

第二節普通染色觀察

一、HE染色法

二、吉姆薩染色法

三、載坡片處理方法

第三節細胞化學技術

一、酸性磷酸酶

二、葡萄糖?6?磷酸酶

三、琥珀酸脫氫酶

四、DNA與RNA的吖啶橙螢光染色法

五、DNA的富爾根(Feulgen)染色法

第四節免疫細胞化學技術

一、常用免疫細胞化學技術原理

二、常用的顯色標記物

(一)辣根過氧化物酶

(二)鹼性磷酸酶

(三)螢光素

(四)膠體金與免疫金銀技術

三、免疫細胞化學方法及標記物的選擇

四、免疫細胞化學的一般問題

五、免疫細胞化學染色的典型程式

(一)免疫酶間接法

(二)免疫螢光LSAB法

(三)PAP法

(四)SPA?膠體金銀法

第五節原位雜交技術

一、探針與標記物的選擇

二、原位雜交技術主要實驗材料

三、雜交

四、顯示標記物

五、設立對照

第六節電子顯微鏡技術

一、超薄切片技術

(一)對培養物的預處理

(二)標本製備

二、電鏡免疫細胞化學技術

(一)顯示細胞表面抗原

(二)顯示細胞內抗原

三、其它電鏡技術簡介

(一)掃描電鏡技術

(二)冷凍蝕刻復型技術

第二部分動物基本組織的體外培養

第八章上皮組織的體外培養

第一節上皮組織體外培養技術概論

一、在體生長與體外培養的上皮組織的基本特點

(一)上皮組織的形態結構

(二)上皮細胞的極性

(三)上皮細胞間的連線

二、體外培養的上皮組織細胞的生長生物學

(一)體外培養上皮細胞的形態結構

(二)體外培養上皮組織的生長與增殖特徵

三、體外培養上皮組織細胞的觀察與檢測

(一)一般形態學觀察

(二)組織化學與免疫組織化學觀察與檢測

第二節呼吸系統有關的上皮細胞培養

一、呼吸道導氣部上皮細胞的體外培養

二、呼吸道導氣部上皮分泌細胞的懸浮培養

三、Ⅱ型肺泡細胞的培養

四、鼻咽上皮細胞的體外培養

第三節消化系統有關的上皮細胞培養

一、食管黏膜上皮細胞的培養

二、胃黏膜上皮細胞的培養

三、腸黏膜上皮細胞的培養

四、膽囊和肝外膽管上皮細胞的培養

第四節腺上皮細胞的體外培養

一、唾液腺上皮細胞的培養

二、乳腺上皮細胞的培養

(一)乳腺上皮細胞原代培養的建立和維持

(二)乳腺上皮細胞的懸浮培養

(三)乳腺上皮細胞在EHS基質上的培養

(四)乳腺上皮細胞的其它培養方法

(五)乳腺上皮細胞培養中的有關問題

第五節表皮細胞的體外培養

一、表皮角質形成細胞的飼養層細胞培養法

二、角質形成細胞的複合培養法

(一)在人去表皮真皮上培養角質形成細胞

(二)在真皮替代物上培養角質形成細胞

三、表皮黑(色)素細胞的培養

四、表皮郎格漢斯細胞的培養

第六節血管內皮細胞的體外培養

一、豬主動脈內皮細胞的培養

二、免主動脈內皮細胞的體外培養

三、人臍靜脈內皮細胞的培養

四、大鼠主動脈內皮細胞的培養

五、濾膜培養法培養血管內皮細胞

六、免腦微血管內皮細胞培養

七、大鼠肺微血管內皮細胞的培養

第七節胸腺上皮細胞的體外培養

第九章結締組織的體外培養

第一節結締組織細胞的生長生物學特點與基本分離技術

一、結締組織細胞的生長生物學特點

二、體外培養結締組織細胞的基本分離技術

第二節結締組織細胞培養各論

一、成纖維細胞的體外培養

(一)真皮成纖維細胞的體外培養

(二)人包皮成纖維細胞的無血清培養

(三)中國倉鼠胚胎成纖維細胞的體外培養

(四)雞胚成纖維細胞的體外培養

(五)人胚肺成纖維細胞的體外培養

(六)小鼠腎間質成纖維細胞的體外培養

(七)眼組織成纖維細胞的體外培養

二、巨噬細胞的體外培養

(一)獲取肺泡巨噬細胞的方法

(二)獲取腹腔巨噬細胞的方法

(三)巨噬細胞的純化

(四)巨噬細胞的接種和培養

三、脂肪細胞的體外培養

(一)大鼠前脂肪細胞的原代培養

(二)小鼠前脂肪細胞的原代培養

四、肥大細胞的體外培養

(一)肺肥大細胞的體外培養

(二)腸肥大細胞的體外培養

(三)皮膚肥大細胞的分離和短期培養

五、間充質幹細胞的體外培養

(一)雞胚肢芽間充質幹細胞的體外培養

(二)大鼠骨髓間充質幹細胞的體外培養

(三)人骨髓間充質幹細胞的體外培養

(四)兔骨髓間充質前體細胞的體外成軟骨培養

第十章幾種重要臟器細胞與特殊動物細胞的體外培養

第一節眼組織細胞的體外培養

一、角膜上皮細胞和內皮細胞的體外培養

(一)角膜上皮細胞的培養

(二)角膜內皮細胞的培養

二、小梁細胞的體外培養

三、視網膜色素上皮細胞的體外培養

四、晶狀體上皮細胞的體外培養

五、視網膜米勒細胞的體外培養

第二節骨與軟骨組織的體外培養

一、成骨細胞的培養

(一)骨內成骨細胞的培養

(二)骨膜內成骨細胞培養

二、破骨細胞的培養

(一)成熟破骨細胞分離細胞培養法

(二)骨髓長時間培養誘導分侖形成破骨細胞法

三、滑膜細胞的培養

(一)滑膜植塊培養法

(二)分離的滑膜細胞培養法

四、軟骨細胞的培養

(一)關節軟骨細胞的短期培養

(二)人關節軟骨細胞的長期培養法

第三節泌尿生殖系統有關的幾種細胞培養

一、生精細胞的體外培養

二、睪丸支持細胞的培養

三、睪丸間質細胞的培養

四、腎小管上皮細胞的培養

五、腎小球系膜細胞的培養

第四節幾種內分泌細胞的體外培養

一、胰島細胞的體外培養

二、人垂體腺瘤細胞培養

三、甲狀腺細胞的體外培養

第五節羊水細胞的體外培養

一、羊水細胞的體外培養基本方法

二、羊水細胞的富集培養法

第六節胚胎幹細胞的體外培養

一、體外培養胚胎幹細胞的技術原理

二、體外培養胚胎幹細胞的基本過程

(一)飼養層細胞的培養

(二)飼養單層的製備

(三)用於培養胚胎幹細胞的條件培養基的製備

(四)胚胎幹細胞的分離與培養

(五)胚胎幹細胞的凍存與復甦

三、胚胎幹細胞的鑑定

(一)鹼性磷酸酶檢測

(二)核型的鑑定

(三)體外分化能力觀察

(四)體內分化能力的觀察

(五)嵌合能力的測定

第十一章造血幹細胞的檢測與造血祖細胞的體外培養

第一節概論

一、造血幹細胞的生物學特徵

(一)造血幹細胞的基本特性

(二)對造血幹細胞的識別

(三)造血幹細胞的胞齡結構

(四)造血幹細胞的動力學

二、造血祖細胞

第二節造血幹細胞的測定技術

一、CFU?S的檢測技術

二、以標記染色體測定脾結節的形成

三、脾結節移植法測定脾結節CFU?S

第三節體外培養造血祖細胞的特殊實驗材料

一、培養用液

二、特異性刺激因子的製備

(一)橫紋肌條件培養液的製備

(二)白細胞條件培養液

(三)脾細胞條件培養液

(四)再障病人血清的製備

(五)胎肝細胞裂解液的製備

第四節造血祖細胞的體外富集與培養

一、造血祖細胞的富集

(一)單個核細胞的分離

(二)CD34+細胞及其分離方法

(三)CD34+細胞的MACS免疫磁性分離方法

二、造血祖細胞的體外培養

三、各類造血祖細胞的培養技術

(一)CFU?GM的培養

(二)紅系造血祖細胞的培養

(三)巨核造血祖細胞的培養

(四)混合細胞集落的培養

(五)白血病細胞的培養

(六)無血細胞體內擴散匣培養技術

第五節造血祖細胞培養技術的實際套用

一、正常人骨髓內各種造血祖細胞的含量測定

二、某些血液疾病的細胞病理學

三、藥物對造血細胞的作用研究

四、再生障礙性貧血的發病機制和預後以及造血幹細胞移植治療

五、體外測定造血祖細胞輻射敏感性與全身放射敏感性反應的關係

第十二章血淋巴細胞的體外培養

第一節各類淋巴細胞的主要特徵

一、T淋巴細胞

(一)T細胞的表面標誌

(二)T細胞亞群及其功能

二、B淋巴細胞

(一)B細胞的表面標誌

(二)B細胞的亞群

三、大顆粒淋巴細胞

(一)NK細胞

(二)K細胞

第二節血淋巴細胞的分離

一、單個核細胞的分離

二、純淋巴細胞的製備

(一)玻璃黏附法

(二)羰基鐵粉法

三、T細胞和B細胞的分離

(一)T細胞花環沉降法

(二)尼龍毛柱分離法

四、大顆粒淋巴細胞的分離

五、螢光激活細胞分離儀分離淋巴細胞及其亞群

六、免疫磁珠法分離各種淋巴細胞及其亞群

第三節血淋巴細胞的體外培養方法和套用

一、淋巴細胞轉化試驗

二、B細胞產生免疫球蛋白的檢查

三、T細胞介導的細胞毒試驗

四、NK細胞毒性試驗

五、K細胞毒性試驗

六、LAK細胞的製備

七、淋巴細胞的體外長期培養

(一)用IL?2建立T淋巴細胞克隆

(二)用EB病毒轉化B淋巴細胞

(三)用B細胞生長因子建立B淋巴細胞株

第十三章肌肉組織的體外培養

第一節肌肉組織體外培養技術概論

一、肌肉組織體外培養技術的發展簡史

二、肌肉組織細胞培養的意義與評價

第二節心肌細胞的體外培養

一、心肌細胞培養的基本原理

二、心肌細胞培養用液

(一)常用平衡鹽溶液

(二)心肌細胞培養液

(三)其它培養用液

三、心肌細胞的培養方法

(一)心肌細胞的原代培養

(二)成年動物的搏動心肌細胞的製備

(三)心肌細胞培養方法的某些發展

四、心肌細胞培養的基本結果與觀測方法

(一)一般觀察

(二)培養心肌細胞的形態學觀察

(三)心肌細胞搏動的觀察

五、培養心肌細胞的某些電生理特性

六、培養心肌細胞代謝的某些特點

第三節平滑肌細胞的體外培養

一、平滑肌細胞體外培養方法

二、培養平滑肌細胞的結果與鑑定

三、影響血管平滑肌細胞增殖的因素

第四節骨骼肌細胞的體外培養

一、骨骼肌細胞培養所需主要材料

二、骨骼肌細胞培養方法

(一)烏類骨骼肌細胞的培養

(二)嚙齒類動物骨骼肌細胞原代培養方法

(三)從嚙齒類動物肌肉中獲取高純度肌源性細胞的新方法

三、肌源性細胞系的建立

第十四章神經組織的體外培養

第一節神經元的體外培養

一、神經組織的植塊培養法

(一)概述

(二)灰質組織或神經節的體外培養

(三)白質植塊的培養

二、神經元的分離細胞培養方法

(一)材料的來源

(二)神經元體外培養液

(三)神經元體外培養的生長基質

(四)神經元的分離細胞培養過程

(五)神經元細胞的體外培養

第二節神經膠質細胞的體外培養

一、星形膠質細胞的體外培養

(一)取材的動物年齡與部位

(二)星形膠質細胞的體外培養方法

(三)星形膠質細胞的無血清限定性培養液

(四)星形膠質細胞的形態學特徵與化學標誌物

二、少突膠質細胞的體外培養

(一)體外純化過程

(二)體外培養少突膠質細胞的化學限定性培養基

(三)少突膠質細胞的化學標誌物

(四)少突膠質細胞的形態學特徵

三、施旺細胞的體外培養

(一)施旺細胞的體外培養方法

(二)施旺細胞的無血清限定性培養基

(三)施旺細胞體外生長的形態學特徵與化學標誌物

四、小膠質細胞的體外培養

(一)小膠質細胞的體外培養方法

(二)小膠質細胞的形態學特徵與鑑定

五、其它神經膠質細胞的體外培養

六、體外培養神經組織分離細胞的形態學特徵比較

第三節各類神經組織細胞的培養方法

一、雞胚背根節的體外培養

二、大鼠頸上神經節的體外培養

三、大鼠小腦皮質神經元的體外培養

四、大鼠星形膠質細胞的體外培養

(一)方法一：植塊培養法

(二)方法一：分離細胞培養法

五、大鼠少突膠質細胞的體外培養

(一)方法一：植塊培養法

(二)方法二：密度梯度離心法

(三)方法三：恆溫搖床處理法

六、大鼠施旺細胞的體外培養

(一)方法一：常規分離細胞培養法

(二)方法二：免疫選擇法

(三)方法三：反覆植塊法

七、鼠腦小膠質細胞的體外培養

八、脊髓神經元的體外培養

(一)方法一：差速黏附處理富集脊髓神經元培養法

(二)方法二：台面選淘富集脊髓前角運動神經元培養法

九、鼠腦神經幹細胞的體外培養

(一)胚胎神經幹細胞的體外培養

(二)成年腦組織內神經幹細胞的體外培養

十、大鼠胚胎幾種常用腦區組織體外培養的取材

第三部分特殊類動物細胞的體外培養

第十五章腫瘤細胞的體外培養

第一節腫瘤細胞在體內和體外的生長特性概論

一、腫瘤細胞在體內生長的特徵

二、腫瘤細胞在體外的生長生物學特性

三、腫瘤細胞在體內和體外的生長特徵差別

四、體外培養腫瘤細胞常用的培養基

第二節體外培養腫瘤組織細胞的方法和技術

一、腫瘤組織細胞的原代培養

二、腫瘤細胞的傳代

三、腫瘤細胞的克隆培養法

第三節腫瘤細胞體外生長的細胞生物學特徵

一、腫瘤細胞體外生長的形態學與細胞學特徵

二、腫瘤細胞的核型和異常生長特性

(一)染色體數目及核型

(二)永生性

(三)異質性

(四)動物接種成瘤性

(五)非錨著生長依賴性

第四節已建立的腫瘤細胞系介紹

一、國內已建立的人類腫瘤細胞系介紹

二、國際上已建立的人類腫瘤細胞系

第五節部分腫瘤細胞的體外培養與建系過程

一、人鼻咽癌細胞系(CNE?2)的建立

二、人骨肉瘤細胞系(HOS?8603)的建立

三、大鼠肝卵圓細胞的本外培養

四、人神經母細胞瘤細胞系的建立

五、人肺腺癌細胞系的建立

六、有肺巨細胞癌細胞系的建立

七、人腎顆粒細胞癌細胞系的建立

八、人卵巢癌細胞系的建立

九、人肝癌細胞系的建立

十、人喉腺泡型橫紋肌肉瘤細胞系的建立

十一、人惡性胸膜間皮瘤細胞系的建立

十二、人乳腺癌細胞系(HATTORI)的建立

第六節腫瘤細胞培養的套用

一、腫瘤細胞對組織浸潤的體外研究

二、人惡性腫瘤細胞的動物移植瘤研究

三、培養腫瘤細胞的體外分化實驗

四、培養腫瘤細胞的凋亡誘導研究

第十六章病原微生物的培養

第一節病原微生物培養技術概論

一、病原微生物培養的基本原理

二、病原微生物培養的基本方法和技術

三、病原微生物培養的套用

第二節細菌的培養

一、細菌培養的基本條件

(一)細菌培養基

(二)細菌生長的其它條件

二、細菌生長繁殖的特點

三、細菌培養的基本技術

(一)無菌操作技術

(二)細菌接種技術

四、細菌培養的方法

(一)一般培養法

(二)二氧化碳培養法

(三)厭氧培養法

五、各別類細菌的培養

(一)致病性葡萄球菌的培養

(二)幽門螺旋桿菌的培養

(三)結核桿菌的培養

(四)淋球菌(淋病奈瑟氏菌)的培養

第三節其它類菌的培養

一、放線菌的培養

(一)放線菌培養的一般條件

(二)放線菌培養基

二、真菌的培養

(一)真菌培養的一般條件

(二)常見致病真菌的培養基

三、支原體培養

(一)支原體培養的一般條件

(二)常見病原支原體的培養基

四、立克次體的培養

(一)立克次體培養的一般條件

(二)常見病原立克次體的培養

五、衣原體培養

(一)衣原體培養的一般條件

(二)常見的病原性衣原體的培養

六、螺旋體的培養

(一)螺旋體培養的一般條件

(二)鉤端螺旋體培養基

(三)常見病原螺旋體的培養

第四節病毒的培養

一、宿主細胞培養法

二、雞胚培養法

三、各別類宿主細胞培養法

(一)EB病毒的培養

(二)脊髓灰質炎病毒的培養

(三)B型肝炎病毒DNA轉染細胞系的建立和套用

第十七章醫學寄生蟲的體外培養

第一節寄生蟲的體外培養技術概論

一、寄生蟲的營養與代謝特點

二、寄生蟲的體外培養技術類別

(一)寄生蟲蟲體培養

(二)寄生蟲細胞培養

(三)寄生蟲的體外培養常用培養基

三、寄生蟲體外培養技術的套用

(一)在生物學研究中的套用

(二)在病理與免疫學研究中的套用

(三)在藥物學研究中的套用

第二節瘧原蟲體外培養

一、瘧原蟲紅外期體外培養

(一)約氏瘧原蟲紅外期的體外培養

(二)人瘧原蟲紅細胞外期體外培養

二、瘧原蟲紅內期體外培養

(一)體外長期連續培養

(二)同步培養法

(三)瘧原蟲冷凍保存技術

三、惡性瘧原蟲配子體的體外培養

第三節機會性致病原蟲的體外培養

一、弓形蟲的體外培養

(一)速殖子的培養方法之一：單層貼壁細胞接種培養法

(二)速殖子的培養方法之二：懸浮細胞的接種培養法

(三)速殖子的培養方法之三：在雞胚中種植的培養法

(四)包囊的培養

(五)弓形蟲的冷凍保存技術

二、卡氏肺孢子蟲體外培養

(一)用非洲綠猴腎細胞系培養卡氏肺孢子蟲

(二)用胎兒肺成纖維細胞系培養卡氏肺孢子蟲

三、隱孢子蟲體外培養

(一)在組織細胞內培養

(二)在雞胚中培養

第四節日本血吸蟲體外培養

一、培養基及培養條件

(一)培養基的種類

(二)培養條件

二、各期培養方法

(一)尾蚴人工轉變童蟲體外培養

(二)肺期童蟲體外培養

(三)成蟲體外培養

(四)蟲卵的體外培養

(五)毛蚴至母胞蚴的體外培養

(六)子胞蚴和尾蚴的體外培養

(七)血吸蟲成蟲和童蟲細胞的培養

第五節棘球絛蟲體外培養

一、細粒棘球絛蟲的體外培養

(一)囊型發育

(二)鏈體發育

(三)成蟲體外培養

(四)細胞培養

二、多房棘球絛蟲體外培養

(一)多房棘球絛蟲蟲體培養

(二)多房棘球絛蟲細胞培養