《雞傳染性貧血診斷技術(NY/T 681-2003)》的附錄A為規範性附錄。本標準由農業部畜牧獸醫局提出並歸口。本標準起草單位：農業部獸醫診斷中心。本標準主要起草人：王宏偉、吳清民、田克恭、陳西釗、蘇敬良、王傳彬。
基本介紹
- 外文名：Diagnostic Techniques for Chicken Infectious anemia
- 書名：雞傳染性貧血診斷技術
- 作者：中華人民共和國農業部
- 出版日期：2003年10月1日
- 語種：簡體中文
- ISBN：155066215373
- 出版社：中國標準出版社
- 頁數：6頁
- 開本：16
內容簡介,文摘,
內容簡介
《雞傳染性貧血診斷技術(NY/T 681-2003)》由中國標準出版社出版。
文摘
著作權頁：
CIAV存在於病雞肝臟、皮膚、脾臟、心臟、胸腺、肺臟、法氏囊、腎臟、骨髓等組織器官中。無菌採集這些器官，用無血清DMEM製成20%組織懸液，以3000 r/min離心30 min。取上清70℃下處理5 min後加等量10%三氯甲烷室溫處理15 min，以10000 r/min離心20 min，取上清用於CIAV分離。
3.2操作方法
3.2.1細胞培養
用含15%新生牛血清的DMEM培養基在39℃和5%二氧化碳環境下培養MDCC－MSB1細胞。每2 d～3 d傳代一次，細胞長至2×105個/mL～5×105個/mL時，用於CIAV分離。
3.2.2病料接種
將0.1 mL處理好的組織懸液接種MDCC－MSB1細胞，在39℃和5%二氧化碳環境下培養48 h，觀察結果。
3.2.3結果觀察
CIAV感染細胞表現為細胞體積增大，隨之溶解。若第一次接種未出現細胞病變，應將細胞培養物凍融後盲傳三代。如仍無細胞病變，則判為CIAV檢測陰性。
3.2.4 CIAV的鑑定
將出現細胞病變的細胞培養物，按第5章的方法製備細胞塗片，用CIAV標準陽性血清進行鑑定。
4酶聯免疫吸附試驗
4.1 材料準備
4.1.1試劑
a）ELISA抗原：CIAV抗原包被酶標板；
b） 陽性血清：用CIAV抗原免疫SPF雞獲得的血清；
c） 陰性血清：無CIAV感染的SPF雞血清；
d） 酶結合物：辣根過氧化物酶（HRP）標記抗CIAV單克隆抗體；
e）磷酸鹽緩衝液（PBS）：配製見第A.2章；
f） 洗滌液：配製見第A.3章；
g）樣品稀釋液：配製見第A.4章；
h）底物溶液：配製見第A.6章；
i）終止液：配製見第A.7章。
4.1.2器材
a）酶聯檢測儀；
b） 微量加樣器，容量50 μL—200 μL；
c） 37℃恆溫培養箱。
CIAV存在於病雞肝臟、皮膚、脾臟、心臟、胸腺、肺臟、法氏囊、腎臟、骨髓等組織器官中。無菌採集這些器官，用無血清DMEM製成20%組織懸液，以3000 r/min離心30 min。取上清70℃下處理5 min後加等量10%三氯甲烷室溫處理15 min，以10000 r/min離心20 min，取上清用於CIAV分離。
3.2操作方法
3.2.1細胞培養
用含15%新生牛血清的DMEM培養基在39℃和5%二氧化碳環境下培養MDCC－MSB1細胞。每2 d～3 d傳代一次，細胞長至2×105個/mL～5×105個/mL時，用於CIAV分離。
3.2.2病料接種
將0.1 mL處理好的組織懸液接種MDCC－MSB1細胞，在39℃和5%二氧化碳環境下培養48 h，觀察結果。
3.2.3結果觀察
CIAV感染細胞表現為細胞體積增大，隨之溶解。若第一次接種未出現細胞病變，應將細胞培養物凍融後盲傳三代。如仍無細胞病變，則判為CIAV檢測陰性。
3.2.4 CIAV的鑑定
將出現細胞病變的細胞培養物，按第5章的方法製備細胞塗片，用CIAV標準陽性血清進行鑑定。
4酶聯免疫吸附試驗
4.1 材料準備
4.1.1試劑
a）ELISA抗原：CIAV抗原包被酶標板；
b） 陽性血清：用CIAV抗原免疫SPF雞獲得的血清；
c） 陰性血清：無CIAV感染的SPF雞血清；
d） 酶結合物：辣根過氧化物酶（HRP）標記抗CIAV單克隆抗體；
e）磷酸鹽緩衝液（PBS）：配製見第A.2章；
f） 洗滌液：配製見第A.3章；
g）樣品稀釋液：配製見第A.4章；
h）底物溶液：配製見第A.6章；
i）終止液：配製見第A.7章。
4.1.2器材
a）酶聯檢測儀；
b） 微量加樣器，容量50 μL—200 μL；
c） 37℃恆溫培養箱。
