重組PCR定點突變

重組PCR定點突變又叫重疊延伸（overlap extension）PCR誘變，該方法利用4條引物，3輪PCR反應來完成，可在DNA任何部位產生定點突變。

基本介紹

• 中文名：重組PCR定點突變
• 外文名：overlap extension

重組PCR定點突變又叫重疊延伸（overlap extension）PCR誘變，該方法利用4條引物，3輪PCR反應來完成，可在DNA任何部位產生定點突變。在PCR#1和PCR#2中，套用2個互補並在相同部位具有相同鹼基突變的內側引物。擴增形成2條有一端可彼此重疊的雙鏈DNA片段，兩者在其重疊區段具有同樣的突變。由於具有重疊的序列，所以在除去了未摻入的多餘引物之後，這兩條雙鏈DNA片段經變性和退火處理，便可能形成兩種不同形式的的異源雙鏈分子。其中，一種具有5‘凹陷末端的雙鏈分子，不能作為TaqDNA聚合酶的底物，會有效地從反應混合物中消除；另一種具有3’凹陷末端的雙鏈分子，可通過TaqDNA聚合酶的延伸作用，產生出具兩重疊序列的雙鏈DNA分子。這種DNA分子用兩個外側寡核苷酸引物進行第三輪PCR擴增，便可產生出一種突變位點遠離末端的突變體DNA。