本品為重組DNA技術生產的由51個胺基酸殘基組成的蛋白質，宿主細胞為大腸桿菌。按乾燥品計算，每1mg含重組人胰島素不得少於27.5單位。重組人胰島素中殘餘宿主DNA和宿主細胞蛋白質為與生產過程相關的、潛在的特異性雜質，必須在生產過程中嚴格控制，其限度應符合有關規定。
基本介紹
- 書名：重組人胰島素
- 又名：Recombinant Human Insulin
- 出版時間：2000年版
- 拼音名：Chongzu Ren Yidaosu
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重組人胰島素
拼音名：Chongzu Ren Yidaosu
英文名：Recombinant Human Insulin
書頁號：2000年版二部-497
C257H338N65O77S6 5807.69
性狀
該品為白色或類白色的結晶性粉末。
該品在水、乙醇和乙醚中幾乎不溶，在稀鹽酸和稀氫氧化鈉溶液中易溶。
鑑別
（1）在效價測定項下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間應與重組人胰島素對照品峰的保
留時間一致。
（2）取該品適量，用0.1%三氟醋酸溶液製成每1ml中含10mg的溶液，取20μl，加0.2mol/L三羥甲基氨基
甲烷-鹽酸緩衝液（pH7.3）20μl、0.1%V8酶溶液20μl與水140μl，混勻，置37℃水浴中2小時後，加磷酸3μl，作為供試品溶液；另取重組人胰島素對照品適量，同法製備，作為對照品溶液。照效價測定項下的方法，以0.2mol/L硫酸鹽緩衝液(pH2.3）-乙腈（90:10）為流動相A，乙腈-水（50:50）為流動相B，進行梯度洗脫。
時間 流動相A 流動相B
0分 90% 10%
5分 80% 20%
45分 40% 60%
50分 40% 60%
取對照品溶液和供試品溶液各25μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品的肽圖譜應與對照品的肽圖譜一致。
檢查
有關物質 取該品適量，用0.01mol/L鹽酸溶液製成每1ml中含3.5mg的溶液，作為供試品溶液。照效價測定項下的方法，以0.2mol/L硫酸鹽緩衝液（pH2.3）-乙腈（82:18）為流動相A，乙腈-水（50:50）為流動相B，進行梯度洗脫。
時間 流動相A 流功相B
0分 78% 22%
36分 78% 22%
61分 33% 67%
67分 33% 67%
調節流動相比例使重組人胰島素主峰的保留時間約為25分鐘，系統適用性試驗應符合效價測定項下的規定。取供試品溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計算，總有關物質不得過3.0%。高分子蛋白質 取該品適量，用溶解液（取乙二胺四醋酸四鈉300mg，加水250ml溶解後，加0.1mol/L鹽酸溶液3ml，加水至500ml）製成每1ml中含1mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，用稀釋液（取乙二胺四醋酸四鈉600mg，加水900ml溶解後，用1mol/L鹽酸溶液調節pH值至8.5，加水至1000ml）稀釋成每1ml中含0.01mg的溶液，作為對照溶液。照高效液相色譜法（附錄Ⅴ D）測定，以適合分離分子量為5000～60000球狀蛋白的色譜用親水矽膠為填充劑；0.4mol/L碳酸氫銨溶液-乙腈（69:31）為流動相；流速為每分鐘0.5ml；檢測波長為214nm。取人胰島素單體-二聚體對照品，用乙二胺四醋酸溶解製成每1ml中含1mg的溶液，取20μl注入液相色譜儀，以人胰島素單體和二聚體之間的峰谷高與二聚體峰高之比作為分離度，分離度應不大於0.6。取供試品溶液和對照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中顯示的所有分子量大於重組人胰島素單體的各峰面積之和，應不得大於對照溶液主峰的峰面積（1.0%）。鋅 精密稱取該品適量（約相當於鋅0.1mg），置10ml量瓶中，用0.01mol/L鹽酸溶液溶解並稀釋至刻度，作為供試品溶液；取供試品溶液與標準鋅溶液（精密稱取硫酸鋅44mg，置100ml量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，每lml相當於10μg的Zn）各1.6ml，分別置10ml量瓶中，各加硼酸-氯化鈉緩衝液（pH9.0)2ml與新制的鋅試劑溶液（取鋅試劑0.13g，加氫氧化鈉試液2ml溶解後，加水使成100ml)1ml，加水稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，照分光光度法（附錄Ⅳ A），在620nm的波長處分別測定吸收度，計算。含鋅量不得過1.0%。
氯 取該品約10mg，精密稱定，照氮測定法（附錄Ⅶ D 第二法）測定，按乾燥品計算，含氮量應為14.5%～16.5%。
乾燥失重 取該品0.2g，在105℃乾燥至恆重，減失重量不得過10.0%（附錄Ⅷ L）。
熾灼殘渣 取該品約0.4g，依法檢查（附錄Ⅷ N），遺留殘渣不得過2.0%。
無菌 取該品，加適量的滅菌0.01mol/L鹽酸溶液製成每1ml中含2mg的溶液，用薄膜過濾法處理後，依法檢查（附錄Ⅺ H），應符合規定。
細菌內毒素 取該品，依法檢查（附錄Ⅺ E），每1mg重組人胰島素中含內毒素的量應小於10EU。
效價測定
照高效液相色譜法（附錄Ⅴ D）測定。
色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑（5～10μm）；0.2mol/L硫酸鹽緩衝液 （取無水硫酸鈉28.4g，加水溶解後，加磷酸2.7ml、水800ml，用乙醇胺調節pH值至2.3，加水至1000ml)-乙 腈（74:26，或適宜比例）為流動相；流速為每分鐘1.0ml；柱溫為40℃；檢測波長為214nm。取系統適用性試驗用溶液（取重組人胰島素對照品，用0.01mol/L鹽酸溶液製成每1ml中含1mg的溶液，室溫放置至少24小時）注入液相色譜儀，胰島素主峰和A21脫氨胰島素峰之間的分離度應不小於1.8，拖尾因子應不大於1.8。
測定法 取該品適量，精密稱定，用0.01mol/L鹽酸溶液製成每1ml中含10.0單位的溶液（臨用新配）。取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取重組人胰島素對照品適量，同法測定。按外標法以峰面積計算。
類別
降血糖藥。
貯藏
遮光，密閉，在－15℃以下保存。
製劑
（1）重組人胰島素注射液（2）精蛋白重組人胰島素注射液
