《邊緣細胞NKCC1的功能性表達與老年性聾的發病機制》是依託華中科技大學，由褚漢啟擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：邊緣細胞NKCC1的功能性表達與老年性聾的發病機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：褚漢啟
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
NKCC1、KCNQ1、Na,K-ATPase三種鉀離子轉運蛋白對於耳蝸鉀離子循環、EP的形成和維持及聽覺功能至關重要。老年性聾是多因素作用引起的年齡相關性聽力損失。前期的研究發現NKCC1、KCNQ1與老年性聾發病有一定關聯,而螺旋韌帶的α2Na,K-ATPase對老年性聾影響甚微,為了闡明NKCC1在聽覺和老年性聾發病中的作用,我們採用不同基因型小鼠(KCNQ1+/-, NKCC1+/-, KCNQ1+/-/NKCC1+/-, NKCC1+/-/α1Na,K-ATPase,C57BL/6，CBA/J,BAL B/C)作為實驗對象建立老年性聾動物模型,利用聽覺生理學、內耳形態學、細胞培養、分子生物學和膜片鉗等方法研究邊緣細胞NKCC1的功能性表達和年齡相關性變化。本課題將從新的視角闡明老年性聾的具體發生機制,為完善以耳蝸鉀循環為主的聽覺機理提供實驗理論依據,為老年性聾的防治提供新的靶點。
結題摘要
老年性聾是多因素作用引起的年齡相關性聽力損失。NKCC1、 KCNQ1、 Na,K-ATPase三種鉀離子轉運蛋白對於耳蝸鉀離子循環、 EP的形成和維持及聽覺功能至關重要。前期的研究發現NKCC1、KCNQ1與老年性聾發病有一定關聯。本課題通過利用ABR、 DPOAE等聽覺生理檢測技術， EP等電生理技術，以及電鏡、免疫螢光、邊緣細胞培養方法，對各系小鼠進行了關於NKCC1鉀離子轉運蛋白的功能研究. 用免疫組織化學、 雷射共聚焦顯微技術、免疫電鏡、 RT-PCR、 Westernblot、 ELISA等方法檢測NKCC1離子轉運蛋白在血管紋邊緣細胞的定位，以及其在不同種系不同鼠齡小鼠血管紋組織中表達差異。結果，KCNQ1雜合子小鼠、 NKCC1雜合子小鼠EP隨年齡下降，具有AHL特點，其發病與相應的離子轉運蛋白NKCC1表達下降有關；NKCC1+/-KCNQ1+/-雙雜合子小鼠具有穩定的聽力，其EP在各年齡段相對保持穩定；C57BL/6J小鼠也具有AHL特點，NKCC1主要表達於耳蝸血管紋邊緣細胞底側膜，隨年齡增加，表達量也明顯下降，其EP也隨年齡下降，推測其發病與相應的離子轉運蛋白NKCC1表達下降有關。綜上，初步闡明了NKCC1離子轉運蛋白的在耳蝸中的分布、年齡相關性表達、在EP形成過程中的作用，及在AHL發病過程中的變化。初步明確EP和K+循環在老年性耳聾發生中的內在相互作用機制，明確血管紋邊緣細胞NKCC1與老年性耳聾發病的確切機制，有助於篩選潛在的 AHL 致病靶點基因和離子通道，進一步明晰完善耳蝸 K+循環理論，為完全闡明 AHL 發病機制提供新思路。
