轉錄抑制因子DACH1通過FasN抑制乳腺癌細胞增殖和轉移的研究

《轉錄抑制因子DACH1通過FasN抑制乳腺癌細胞增殖和轉移的研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由周潔擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：轉錄抑制因子DACH1通過FasN抑制乳腺癌細胞增殖和轉移的研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：周潔
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

乳腺癌是婦女常見惡性腫瘤。研究表明，腫瘤抑制因子DACH1能夠顯著抑制乳腺癌細胞的增殖和轉移，但其作用機制仍不十分清楚。為探索其機理，我們從DACH1的DNA結合序列入手進行分析，初步結果提示DACH1能夠識別並轉錄抑制在乳腺癌中高表達的脂代謝關鍵酶FasN。同時我們發現，如果在乳腺癌細胞系中過表達DACH1，則FasN水平降低，細胞增殖受到抑制。這提示我們DACH1可能通過FasN發揮腫瘤抑制作用。為闡明DACH1和FasN在乳腺癌發病機制中的關係，我們首先利用多種分子生物學手段明確DACH1對FasN的轉錄抑制作用並探討其可能機制，其次在細胞和動物水平證明DACH1可以通過負調控FasN影響乳腺癌細胞的增殖和轉移。本項目的開展將深化人們對DACH1和FasN功能的理解，從DACH1負調控脂代謝的角度闡明DACH1在乳腺癌發病機制中的作用，為後續篩選治療靶點，尋找新的抗腫瘤藥物提供依據。

結題摘要

轉錄抑制因子DACH1的表達水平與乳腺癌患者遠期生存率負相關。DACH1的過表達可抑制乳腺癌細胞的增殖轉移。FasN是脂類代謝過程中的關鍵酶。其高表達有利於維持腫瘤細胞的惡性表型。抑制FasN的活性或表達水平能夠阻斷乳腺癌細胞DNA複製，誘導腫瘤細胞凋亡。我們的研究結果提示，在293T細胞中DACH1抑制FasN的轉錄活性。在乳腺癌細胞系中過表達DACH1，FasN的表達降低，抑制細胞增殖。這說明DACH1和FasN之間的調控關係可能是DACH1影響乳腺癌細胞增殖和轉移的機制之一。通過本課題我們證實了（1）DACH1抑制FasN的轉錄活性。我們首先構建了FasN的報告基因載體及不同的突變體。利用ChiP assay證實DACH1可以被募集到FasN的啟動子區。我們分別以293T和乳腺癌細胞為模型，利用報告基因實驗證實DACH1可以劑量依賴方式抑制FasN的轉錄活性。我們以ponA可誘導的MDA-MB-231細胞為模型，經ponA誘導DACH1表達，FasN轉錄活性下降。同時我們發現AP-1是DACH1抑制FasN轉錄活性的重要結合位點。（2）DACH1抑制FasN轉錄活性需要TCERG1和ANP32A/B參與。我們的前期工作表明DACH1可結合於TCERG1。以293T為模型，利用SiRNA技術和報告基因分析，我們證實了DACH1發揮轉錄抑制效應需要TCERG1作為co-repressor。此外，ANP32A/B也參與了DACH1對FasN的轉錄抑制作用。（3）DACH1與FasN的表達負相關。將shDACH1導入MCF-7下調DACH1表達，則FasN的表達水平上調。以ponA可誘導的MDA-MB-231為模型，ponA誘導DACH1表達可降低FasN表達。乳腺癌組織的免疫組化染色也表明DACH1的表達與FasN負相關。（4）功能性實驗：以ponA可誘導的MDA-MB-231為模型，利用病毒感染過表達GFP-FasN，通過細胞增殖、克隆形成侵襲實驗和裸鼠荷瘤實驗證實DACH1通過FasN抑制乳腺癌細胞的增殖和轉移。綜上所述，我們不僅在DACH1、FasN和乳腺癌之間建立了聯繫，而且從轉錄抑制脂肪酸合成酶的角度解釋了為什麼DACH1能夠顯著抑制乳腺癌細胞的增殖和侵襲。這將為後續篩選乳腺癌治療靶點以及DACH1做為預測乳腺癌患者臨床預後效果的新指標提供依據。