暗視野顯微鏡

暗視野顯微鏡（dark field microscope）是光學顯微鏡的一種，也叫超顯微鏡（ultramicroscope ）。暗視野顯微鏡（dark field microscope）的聚光鏡中央有擋光片，使照明光線不直接進人物鏡，只允許被標本反射和衍射的光線進入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見到小至 4~200nm的微粒子，解析度可比普通顯微鏡高50倍。

基本介紹

• 中文名：暗視野顯微鏡
• 外文名：dark field microscope
• 性質：光學顯微鏡
• 原理：丁達爾光學效應的原理

套用原理

暗視野顯微鏡是利用丁達爾（Tyndall）光學效應的原理，在普通光學顯微鏡的結構基礎上改造而成的。暗視野聚光器，使光源的中央光束被阻擋。不能由下而上地通過標本進入物鏡。從而使光改變途徑，傾斜地照射在觀察的標本上，標本遇光發生反射或散射，散射的光線投入物鏡內， 因而整個視野是黑暗的。

鉤端螺旋體(暗視野映光法)

暗視野顯微鏡的基本原理是丁達爾效應。當一束光線透過黑暗的房間,從垂直於入射光的方向可以觀察到空氣里出現的一條光亮的灰塵“通路”,這種現象即丁達爾效應。暗視野顯微鏡在普通的光學顯微鏡上換裝暗視野聚光鏡後,由於該聚光器內部拋物面結構的遮擋,照射在待檢物體表面的光線不能直接進入物鏡和目鏡,僅散射光能通過,因而視野是黑暗的。暗視野顯微鏡由於不將透明光射入直接觀察系統，無物體時，視野暗黑，不可能觀察到任何物體；當有物體時，以物體衍射回的光與散射光等在暗的背景中明亮可見。在暗視野觀察物體，照明光大部分被折回，由於物體(標本)所在的位置結構，厚度不同，光的散射性，折光等都有很大的變化。

結構與改裝

暗視野顯微鏡基本結構是將普通顯微鏡光學組加上擋光片。普通顯微鏡只要聚光器是可以拆卸的，支架的口徑適於安裝暗視野聚光器，即可改裝成暗視野顯微鏡。在無暗視野聚光時，可用厚黑紙片製作一個中央遮光板，放在普通顯微鏡的聚光器下方的濾光片框上，也能得到暗視野效果。擋光片是用來擋住光源中間的光線，讓光線只能從周圍射入標本，大小約和光圈大小相同。不同倍率用不同的光圈，所以要製作不同的擋光片。

實際套用

臨床上，暗視野顯微鏡常用於檢查蒼白螺旋體。這是一種病原體檢查，對早期梅毒的診斷有十分重要的意義。

適用範圍

暗視野顯微鏡常用來觀察未染色的透明樣品。這些樣品因為具有和周圍環境相似的折射率，不易在一般明視野之下看的清楚，於是利用暗視野提高樣品本身與背景之間的對比。這種顯微鏡能見到小至4~200nm的微粒子，只能看到物體的存在、運動和表面特徵，不能辨清物體的細微結構。

使用方法

(1) 把暗視野聚光器裝在顯微鏡的聚光器支架上。

(2) 選用強的光源，但又要防止直射光線進入物鏡，所以一般用顯微鏡燈照明。

(3) 在聚光器和標本片之間要加一滴香柏油，目的是不使照明光線於聚光鏡上面進行全反射，達不到被檢物體，而得不到暗視野照明。

(4) 升降集光器，將集光鏡的焦點對準被檢物體，即以圓錐光束的頂點照射被檢物。如果聚光器能水平移動並附有中心調節裝置，則應首先進行中心調節，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴格位於一直線上。

(5) 選用與聚光器相應的物鏡，調節焦距，找到所需觀 察的物像。