《負性協同刺激分子B7-H1在胃癌組織中表達的調節機制研究》是依託蘇州大學，由汪維鵬擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：負性協同刺激分子B7-H1在胃癌組織中表達的調節機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：汪維鵬
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
研究發現B7-H1的mRNA廣泛表達於多種非淋巴組織，而其蛋白在正常組織中表達限於免疫細胞，提示B7-H1的表達屬於轉錄後調控過程。近期基因調控機制研究結果提示B7-H1蛋白在腫瘤組織中表達可能受其3'-UTR內SNP與miRNA共同調節。鑒此，本項目以SNP和miRNA為切入點，選擇胃癌為研究對象，首先擬採用生物信息學方法篩選出候選SNP和候選miRNA；然後採用ASA法、免疫組化法和實時RT-PCR法分別測定候選SNP類型、B7-H1蛋白表達和miRNA表達量，比較它們在病例組和對照組中的差異，並結合臨床和病理資料統計分析其與胃癌的臨床相關性；最後採用螢光素酶報告分析系統深入研究這些SNP和miRNA在B7-H1蛋白表達中的調節機制，及其在胃癌發生髮展過程中的作用機制，為最終闡明遺傳變異影響胃癌免疫逃逸的分子機理和研發以B7-H1為靶標的治療途徑奠定基礎，具有理論創新性和潛在運用價值。
結題摘要
研究發現，負性協同刺激分子B7-H1 的mRNA 廣泛表達於多種非淋巴組織，而其蛋白在正常組織中表達限於免疫細胞，提示B7-H1 的表達屬於轉錄後調控過程。近期基因調控機制研究結果提示，B7-H1 蛋白在腫瘤組織中表達可能受其3'-UTR 內SNP 與miRNA 共同調節。鑒此，我們首先採用生物信息學方法篩選出候選SNP和miRNA；然後採用測序法、免疫組化法、實時螢光定量PCR 法分別測定B7-H1基因3'-UTR 內SNP基因型、B7-H1蛋白表達和miRNA 表達量，比較它們在病例組和對照組中的差異，並統計分析其與胃癌的臨床相關性；最後採用螢光素酶報告分析系統深入研究這些SNP 和miRNA在B7-H1 蛋白表達中的調節機制，及其在胃癌發生髮展過程中的作用機制。 DNA測序分析發現，胃癌（128/205）、食管癌（17/24）、腸癌（6/16）、肝癌（7/19）和胰腺癌（6/12）組織，以及腫瘤細胞株（2/12）中B7-H1基因3′-UTR發生了一個G大於C點突變，位於microRNA miR-570結合靶點的“關鍵區域（seed region）”內。體外功能實驗證實，該突變影響了miR-570對B7-H1蛋白表達的調控，導致B7-H1蛋白在癌組織中異常表達；進一步統計分析發現，該突變的發生與胃癌細胞分化程度、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移和TNM分期等臨床病理參數顯著相關（p<0.001），且與患者年齡、吸菸和飲酒等危險因素也顯著相關，從而介導了胃癌的免疫逃逸，在胃癌的發生髮展過程中起著極其重要的作用。 隨後，我們測定了205例胃癌患者及393例正常健康人外周血中B7-H1基因3′-UTR上的SNP基因型，發現rs4143815（C>G）位點在胃癌患者與正常健康人群中的基因型分布存在顯著差異 （p=1.32×10-8）。與CC純合子相比，GG純合子和G等位基因攜帶者患胃癌的風險分別是健康對照組的3.73倍（p=2.98×10-8）和1.85倍（p=0.002）。進一步統計分析發現，這些基因型與腫瘤發生位置、細胞分化程度、腫瘤浸潤深度和TNM分期等臨床病理參數顯著相關（p小於0.001）。 這些發現不僅對闡明B7-H1蛋白在胃癌組織中表達的調節機制有理論意義，還為最終闡明遺傳變異影響胃癌免疫逃逸的分子機理和設計以B7-H1為靶標的治療途徑奠定了基礎，具有潛在的套用價值。
