《豬孤雌胎兒發育阻滯的影響因素研究》是依託吉林大學，由李占軍擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：豬孤雌胎兒發育阻滯的影響因素研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李占軍
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
哺乳動物孤雌生殖機制是備受關注但又了解甚少的科學問題。近年來豬因其與人類相似的生理結構已成為醫學模型和生殖領域的研究熱點。已有文獻和本課題組前期實驗表明，豬孤雌胚胎在體內可著床並發育至28天，但豬孤雌胎兒發育延緩且印跡基因發生重建，上述現象的產生機制尚不明確。為進一步揭示豬孤雌胎兒發育阻滯的相關分子機制，本研究擬以豬孤雌發育胎兒、胎盤為研究對象，採用實時螢光定量PCR比較分析胎兒及胎盤的印跡基因表達差異，進一步通過巢式甲基化特異性PCR(nMS-PCR)對印跡基因的差異甲基化區（DMR）進行測定，探索印跡基因表達情況及其甲基化模式；採用豬基因組表達晶片對胎兒及胎盤組織進行基因表達差異分析，對染色體重塑、DNA甲基化、組蛋白的甲基化及乙醯化、DNMT、RNA編輯等通路及相關基因表達差異進行分析，旨在闡明豬孤雌胎兒發育阻滯的分子機制，為構建發育到期的孤雌生殖豬奠定理論基礎。
結題摘要
哺乳動物孤雌生殖機制是備受關注但又了解甚少的科學問題。本課題結果表明，豬孤雌胚胎在體內可著床並發育，但其發育延緩且印跡基因紊亂表達，尤其是印跡基因H19/Igf2 的異常表達，可能是哺乳動物孤雌發育阻滯的重要因素。主要的學術成果包括：1. 驗證了印記基因H19/Igf2,NNAT, MEST等基因的基因表達模式； 2. 提出印記基因的紊亂表達可能是孤雌發育阻滯的主要因素； 3. 首次提出孤雌胎盤發育阻滯的因素為VEGF120的過表達導致； 4. 驗證了再克隆方法可延長孤雌豬體內發育時間至 39天；5. 篩選出睪丸酮可對H19/Igf2 的基因表達模式進行調控。 此外，通過該項目的實施，本發表相關SCI 論文11篇。 本項目的順利實施，為後續研究利用豬孤雌細胞為研究對象，採用睪丸酮處理，對異常表達的H19/Igf2 進行改善；進一步通過Crispr Cas9對紊亂的印跡基因進行表達調控，使孤雌細胞中的基因組印跡趨於正常化；利用體細胞核移植（SCNT）、胚胎移植技術、B-超檢測、性別鑑定、Southern blot、q-PCR以及RNA-seq等實驗手段，探索延長孤雌豬體內發育時間或構建發育到期孤雌豬的可能性為構建發育到期的孤雌生殖豬奠定理論及實驗基礎。
