基本介紹
- 中文學名：親和標記
- 拉丁學名：affinity labeling
- 界：原生生物界
- 門：細胞生物學
- 綱：蛋白酶
簡介,原理,套用,
簡介
親和標記(affinity labeling)
對酶的活性部位、受體的結合位點進行特異標記的方法。試劑A-X的A基團和X基團可分別與不同的位點進行結合,從而將兩種物質交聯在一起。如用親和標記法分離細胞表面受體時, 先將細胞與超量標記的激素(配體)混合,以飽和所有特異受體的激素結合位點；洗去多餘的激素,然後加入能夠與受體和配體結合的共價交聯劑將激素與受體進行共價交聯達到分離的目的。
原理
親和標記指用對具有特異的親和性物質中導入化學反應基團的試劑，有選擇地修飾存在於活體高分子的對應結合部位的官能基。因根據親和標記的目的而設計的試劑，對相應的活體高分子具特異的親和性，故形成試劑與活體高分子的特異的複合體，結果在結合部位試劑之濃度特別高，因而結合部位的官能基得到良好的修飾。例如，對以芳香族胺基酸為特異的基質的胰凝乳蛋白酶，用基質類似物的TPCK（L-1-甲苯磺醯胺-2-苯乙基氯甲基酮）與之反應，則TPCK在苯丙氨酸之側鏈部分與胰凝乳蛋白酶進行特異的結合，在氯化甲酮部分反應，只是在活性部分存在的組氨酸殘基有選擇地烷基化。為了標記酶的活性中心。效應物的結合部位、抗體的抗原（或不全抗原）的結合部位、受體的激素或神經傳遞物質結合部位、植物外原凝集素的糖結合部位和核糖體的核酸結合部位等，分別設計出導入與之相應的活體分子化學反應基的試劑。最近基於這樣的目的，即從一般與化學試劑反應性低的殘基所結合的部位為特異標記，套用了導入在光照下獲得高度化學反應性的基團的活體分子類似物（光親和標記photoaffinity labeling）。
抗體結合部位(Fab分段)與抗原決定簇之間結合的強度謂之抗體親和力。親和力之高低依抗體結合部位與抗原決定簇之間的分子空間構型及兩者體積大小恰相適合的程度而定。親和標記技術即是測定抗體結合部位的一種免疫化學方法，用以證明抗原與抗體結合的部位及數量。其原理是先用放射性同位素標記抗原或半抗原，並使之與相應抗體結合，然後把抗體水解成多肽，即把重鏈與輕鏈裂解，分離出已與抗原結合的多肽，測定同位素標記結合的部位及數量，從而標定抗體的結合部位及了解抗體結合價的特點。
套用
有人用親和標記技術直接鑑別結合部位的胺基酸殘基。其做法是將一化學性質活躍的側鏈連線到半抗原上，當此帶有側鏈的半抗原與相應抗體結合後，側鏈即與鄰近的胺基酸形成共價鍵，也就是說，結合部位鄰近的胺基酸殘基被標記了。也有人用疊氮基作側鏈連線到半抗原上，並與相應抗體結合，經紫外線照射後，疊氮基轉變成活化的硝基苯基，而硝基苯基能與任何有機基團接觸形成共價結合。這種親和標記可結合在重鏈與輕鏈二者的超可變區上。
