補體調節因子靶向治療重症肌無力的研究

《補體調節因子靶向治療重症肌無力的研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由宋琛擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：補體調節因子靶向治療重症肌無力的研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：宋琛
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

重症肌無力（myasthenia gravis，MG）是典型的器官特異性自身免疫性疾病。其發病與自身抗體攻擊乙醯膽鹼受體（AChR）引起補體介導細胞膜溶解和免疫調變作用相關。我們前期試驗證實針對AChR 的單鏈抗體（scFv）與補體調節因子（DAF）的靶向融合蛋白能在細胞水平保護AChR免受自身抗體攻擊，但其作用機制及對正常神經肌肉接頭傳導的影響尚待進一步探討。本研究擬構建針對AChR不同亞基的scFvs-DAF靶向融合蛋白，並檢測其抗體親和力、補體攻擊保護力。通過TE671細胞系和Lewis大鼠重症肌無力模型，採用免疫組化、流式細胞、放射免疫等手段，從分子、細胞、組織及動物整體水平等多層次比較scFvs-DAF對AChR的保護及影響，進一步明確scFvs-DAF 的作用機制並篩選出高效安全的scFvs-DAF，為MG的特異性免疫治療奠定基礎，並為其他自身免疫病的治療提供一個新的思路。

結題摘要

項目背景：重症肌無力（MG）是一種乙醯膽鹼受體抗體（AChR Abs）介導、細胞免疫依賴、補體參與的自身免疫性疾病。將針對AChR的單鏈抗體與補體調節因子偶聯（scFv-CRP），通過阻止二價的病理性自身抗體與AChR的結合及補體系統激活來保護AChR及突觸後膜免受補體系統的活化所致的免疫損傷是一種可能的靶向治療策略。 研究內容：篩選出對乙醯膽鹼受體AChR有較高親和力的單鏈抗體scFv，並將其通過連線序列(G4S1)3與促衰變因子（DAF）在基因水平偶聯。用原核表達系統表達融合蛋白scFv-DAF，經過最佳化表達及純化、復性後得到正確摺疊的可溶性scFv-DAF。並在分子和細胞水平檢測scFv-DAF是否保留了兩個組分scFv和DAF的功能。重要結果：實驗篩選出有較高AChR結合能力的單鏈抗體，並成功將其與DAF在基因水平偶聯。用原核表達系統對融合蛋白進行了表達純化和重摺疊，得到可溶性scFv-DAF。融合蛋白scFv-DAF不僅在分子水平保留了特異性結合AChR和補體抑制的活性，而且在細胞水平成功將DAF靶向到AChR處，並抑制了經典途徑補體活化，scFv靶向的DAF對補體攻擊破壞的保護作用要優於單純可溶性DAF。關鍵數據及其科學意義：融合蛋白scFv-DAF的成功構建、表達及其功能鑑定，不僅為MG的特異性免疫治療奠定基礎，並且為其他自身免疫病的治療提供新的思路和實驗依據，具有重要套用前景和意義。