螢光密螺旋體抗體吸收試驗

螢光密螺旋體抗體吸收實驗用Nichols株梅毒螺旋體抗原懸液在玻片上塗成菌膜，吸附待檢血清中的lgG抗體，再用螢光素標記的羊抗人lgG抗體，顯示待檢血清中含有的抗螺旋體抗體。因待檢血清預先經吸附劑去除了非特異性抗體，故特異性較高。一般用於篩選實驗陽性標本的確診實驗。

螢光密螺旋體抗體吸收實驗用Nichols株梅毒螺旋體抗原懸液在玻片上塗成菌膜，吸附待檢血清中的lgG抗體，再用螢光素標記的羊抗人lgG抗體，顯示待檢血清中含有的抗螺旋體抗體。因待檢血清預先經吸附劑去除了非特異性抗體，故特異性較高。一般用於篩選實驗陽性標本的確診實驗。
1、操作步驟
（1）抗原片製備：Nichols株梅毒螺旋體（每高倍視野20條）抗原懸液，在玻片上塗數個直徑為5mm的菌膜，乾後以甲醇固定。
（2）待檢血清預處理：待檢血清先經56%30分鐘滅活，取50ul血清與200ul吸附劑（Reiter株非致病密螺旋體）混勻，37℃作用30分鐘，以充分吸除非特異性抗體。
（2）夾心法螢光顯色：吸附後的待檢血清用磷酸鹽緩衝液（PBS）作1;20—1:320的倍比稀釋，將稀釋後的血清分別滴加於抗原菌膜上，置濕盒內37℃孵育30分鐘，然後用PBS洗片，並將玻片在PBS中浸洗，換液3次，每次5分鐘，吹乾。各抗原反應片上滴加工作濃度螢光素標記的羊抗人lgG抗體，置濕盒37℃孵育30分鐘，再用PBS按前法洗片，乾後用甘油緩衝液封片。
（3）螢光顯微鏡觀察：每次實驗設陽性、陰性、非特異性血清對照。陰性標準血清無螢光菌體或偶爾見螢光菌體出現：陽性對照可見多數（高倍視野15條）螢光菌體出現。並以此為參照作出待檢標本的判定。

結果判定：陽性結果參照陽性標準血清的螢光強度判定：半數高倍視野（10條左右）出現螢光，則為（+ +），多半視野呈螢光（15條左右 ）則為（+ + +），全部（約20條）出現強螢光則為（+ + + +）。“可疑”結果參照非特異性血清的螢光強度判定為（+ +）或（+），陰性結果參照陰性對照血清判定為（-）或（+）。