自噬在年齡相關性黃斑變性發生髮展中的作用機制研究

《自噬在年齡相關性黃斑變性發生髮展中的作用機制研究》是依託北京大學，由黃旅珍擔任負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：自噬在年齡相關性黃斑變性發生髮展中的作用機制研究
• 項目負責人：黃旅珍
• 依託單位：北京大學
• 項目類別：面上項目

項目摘要

自噬對維持細胞穩態意義重大，是清除衰老細胞器和氧化損傷的主要機制之一。其功能隨年齡增長而減弱。研究發現自噬在衰老、神經退行性疾病、免疫和炎症感染中具有重要作用，而年齡相關性黃斑變性（AMD）本質是一種與衰老相關的多因素神經退行性疾病。炎症小體與其發病密切相關。視網膜色素上皮細胞（RPE）的氧化損傷在其發生髮展中也具有關鍵作用。研究證實自噬蛋白LC3表達於衰老的視網膜尤其是RPE和感光細胞中；自噬功能障礙與AMD發生髮展有關，但其調控AMD的機制未明。本課題預實驗發現，RPE氧化損傷時LC3-II集聚增加。本課題擬利用RPE細胞系、原代RPE細胞以及乾性和濕性AMD動物模型，通過自噬誘導劑/抑制劑、基因過表達/敲減方法，圍繞線粒體損傷、炎症小體、血管生成促進/抑制因子表達、自噬相關信號通路及RPE細胞功能變化，明確自噬與AMD發生髮展的時相關係，為AMD的發病機制及其作用靶點研究提供依據。

結題摘要

自噬對維持細胞穩態意義重大，是清除衰老細胞器和養護損傷的主要機制之一。本課題圍繞自噬開展了三部分研究。第一部分探討自噬對A2E誘導的 RPE 細胞損傷和炎症反應是否具有保護作用，並從自噬的角度研究其與AMD發病相關的分子機制。結果顯示脂褐素成分A2E能夠抑制RPE細胞的增殖活性，刺激細胞炎症因子和血管生成因子的分泌；A2E 刺激下，能夠誘導 RPE 細胞發生自噬反應；3-MA通過抑制A2E引起的自噬反應，加重了RPE細胞的損傷、炎症因子和新生血管因子的分泌;雷帕黴素通過抑制AKT/mTOR信號通路來激活自噬，一定程度上減輕了A2E造成的細胞損傷和炎症反應。早期激活自噬能夠降低A2E對RPE細胞的損傷作用，起到了保護作用。第二部分體內構建藍光誘導老齡C57小鼠光氧化損傷模型，體外藍光誘導人視網膜色素上皮細胞光氧化損傷模型,探討自噬對光氧化損傷中的作用。結果顯示藍光可以誘導老齡C57小鼠視網膜急性光損傷，自噬和內質網應激在C57 小鼠藍光損傷早期表達上調並協同發揮了抗損傷的作用，促進了C57小鼠視網膜功能修復。RPE細胞藍光氧化損傷後期自噬流再次升高、內質網應激反應加劇，這提示氧化損傷後期可能存在別的參與調節機制。 第三部分從體內（雷射誘導CNV模型）、體外試驗（人原代視網膜血管內皮細胞）研究自噬相關基因EVA1A在AMD中的作用機制。結果顯示，自噬相關基因-EVA1A 基因過表達減少CNV模型的滲漏；其作用機制在於不影響 VEGF 的表達，通過影響自噬相關因子的和促/抑血管生成因子的表達，來抑制CNV的形成。本項目圍繞上述三部分研究，闡述了自噬在AMD發生髮展中的作用，並為探索EVA1A的干預策略奠定了基礎。