自噬介導油性佐劑免疫增強作用的機制研究

《自噬介導油性佐劑免疫增強作用的機制研究》是依託西安交通大學，由朱文華擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：自噬介導油性佐劑免疫增強作用的機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：朱文華
• 依託單位：西安交通大學

中文摘要

我們前期發現降植烷等油性佐劑可誘導巨噬細胞及關節炎動物模型自噬增強，但油性佐劑誘導免疫增強的機制仍不清楚。本項目首先採用降植烷、鯊烯、礦物油等油性佐劑刺激巨噬細胞和樹突狀細胞，通過電鏡觀察雙層膜結構和LC3-I/II轉化檢測等反映自噬水平，並通過自噬抑制劑和RNAi干預自噬通路，確定其在佐劑誘導免疫增強中的介導作用；然後在正常細胞、佐劑刺激的細胞、佐劑刺激的自噬干預細胞中，通過信號通路的磷酸化抗體晶片和免疫印跡技術篩查關鍵信號激酶的活化情況，繼而通過信號通路抑制劑/RNAi干預確定自噬介導免疫增強的通路；最後構建降植烷、鯊烯誘導的類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡等疾病動物模型，檢測免疫器官和靶器官自噬水平，並採用慢病毒在體干預自噬，觀察對疾病及相應炎性通路活化的影響。這些結果將闡明油性佐劑免疫增強作用的確切分子機制，促進新的疫苗和藥物的研發，也為自身免疫疾病的發病機制研究提供新的線索。

結題摘要

我們前期發現降植烷等油性佐劑可誘導巨噬細胞及自身免疫疾病動物模型自噬增強，但油性佐劑誘導免疫增強的機制仍不清楚。本項目首先採用弗氏佐劑、礦物油、降植烷、鯊烯等油性佐劑刺激巨噬細胞，通過電鏡觀察、LC3轉化檢測等反映自噬水平，發現油性佐劑顯著誘導細胞自噬增強，同時巨噬細胞炎症分子TLR3及下游細胞因子表達均升高，同自噬的調控相一致；然後，我們通過自噬抑制劑和RNAi干預自噬通路，發現TLR3及下游細胞因子的表達升高受到了抑制，證實自噬介導了油性佐劑觸發的TLR3調控等炎症反應；機制方面，我們一方面檢測了自噬上游的氧化應激、內質網應激、AMPK和mTOR等通路，發現內質網應激水平升高，mTOR表達受到了抑制，而干預內質網應激則mTOR調節受阻，說明油性佐劑通過誘導細胞內質網應激抑制mTOR通路實現自噬增強；下遊方面我們發現STAT1-IRF1信號通路受到活化，參與TLR3的轉錄調控，而抑制自噬後通路活化受阻；最後我們構建了油性佐劑誘導的自身免疫性關節炎模型，採用慢病毒在體干預自噬，疾病的嚴重度受到了顯著的抑制，從在體水平證實了自噬介導炎症的通路。綜上，我們證實了油性佐劑通過誘導細胞自噬增強，活化STAT1信號通路進而調控TLR3，最終實現免疫增強作用。研究結果闡明了油性佐劑免疫增強作用的確切分子機制，將促進新的疫苗和藥物的研發，也為自身免疫疾病的發病機制研究提供新的線索。