肺炎支原體基因擴增檢測

肺炎支原體基因擴增檢測是一種通過聚合酶鏈式反應（PCR）對肺炎支原體的靶基因進行擴增的分子生物學方法。該檢測方法快速、敏感和特異性均較高。

基本介紹

• 中文名：肺炎支原體基因擴增檢測
• 參考值：PCR結果為陰性
• 臨床意義：能早期檢測感染並可監測治療效果

檢查前準備

肺炎支原體基因擴增檢測敏感性為73%，特異性為94%，可準確檢測出肺炎支原體，且方便快捷，應向患者說明此檢測的意義和必要性，獲得患者理解和同意。而後獲取標本，一般為受檢者咽拭子或痰液。應在獲取標本前進行口腔消毒，並注意標本的無菌處理以及送檢時間。

檢測方法

目前肺炎支原體基因擴增檢測可通過常規PCR、巢式PCR、實時螢光定量PCR、多重PCR等方式進行檢測。其中常規PCR檢測肺炎支原體常用靶基因為16S rRNA、16~23S的內間隔轉錄區(ITS)、23SrRNA的5’末端及Pl基因；巢式PCR檢測肺炎支原體的靶基因與普通PCR相同，通過內側引物和外側引物的兩次擴增進行檢測，其敏感度為普通PCR的23倍，假陰性率低2倍。實時螢光定量PCR用於檢測肺炎支原體的主要方法為探針法，常以肺炎支原體的ATPase操縱子基因、Pl黏附素基因、RepMpl和CARDS基因為靶點設計引物和探針。
各類PCR的基本步驟包括以下步驟。
1.核酸獲取
通過加入裂解劑、孵育、反覆清洗、離心等步驟去除核酸之外的雜質。
2.PCR
通過加入引物等配置反應體系、設定PCR循環及使用PCR儀進行反應對靶基因進行擴增。
3.電泳
對擴增產物進行凝膠電泳並進行檢測，確定標本中是否有靶基因，如果沒有則結果為陰性。

正常參考值

PCR結果為陰性。

臨床意義

肺炎支原體是經呼吸道傳播的原發性非典型肺炎和急性呼吸道感染的重要病原體，其感染常見於兒童及青少年，占非細菌性肺炎的1/3以上，同時可引起嚴重的肺外併發症如腦膜炎、脊髓炎、心肌炎等。肺炎支原體傳統檢測方法中分離培養需要時間長、陽性率很低，免疫學方法由於存在交叉抗原導致假陽性率增加，血清學檢查僅提示抗體滴度變化。而肺炎支原體基因擴增檢測有需要標本量少、檢測快速、操作簡單、特異性和靈敏度高的特點，能夠早期檢測感染並可監測治療效果、進行耐藥性分析，為臨床提供診斷依據和用藥指導，是臨床早期診斷肺炎支原體感染最有價值的方法。