《肝癌轉移相關唾液酸化N-糖蛋白質組研究》是依託復旦大學，由曹晶擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：肝癌轉移相關唾液酸化N-糖蛋白質組研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：曹晶
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
蛋白質糖基化修飾極為重要，也極其複雜。本項目另闢蹊徑，集中力量重點深入研究與肝癌轉移密切相關的唾液酸化N-糖蛋白。在本課題組業已建立的糖基化研究共性技術平台的基礎上，針對唾液酸化N-糖蛋白特有的理化性質，建立其富集、鑑定和定量的分析方法是本項目的研究基礎也將是特色和創新之處；比較研究不同轉移潛能的肝癌細胞質膜/分泌的唾液酸化N-糖蛋白質組，探索肝癌轉移相關的唾液酸化N-糖蛋白的表達變化，發現肝癌轉移相關的潛在唾液酸化N-糖蛋白標誌物，為肝癌的轉移復發的研究和臨床篩選肝癌轉移復發的預警、診治標誌物提供參考，是本項目的研究意義和目的。
結題摘要
蛋白質糖基化是自然界最普遍最重要的蛋白質翻譯後修飾之一。唾液酸糖基化蛋白在生理和病理過程中起著重要的作用，因此，引起了科學家的研究興趣。首先，要建立對唾液酸化糖肽的有效的富集方法。我們首次比較分析了凝集素法和二氧化鈦方法這兩種傳統富集方法的特徵。並且基於唾液酸的負電性，我們創新性地發展了一種新的唾液酸化糖肽富集戰略-固相pH梯度等電聚焦-二氧化鈦色譜富集法：首先用固相pH梯度等電聚焦方法將肽段分離成24個組分，由於唾液酸的負電性，唾液酸化肽段將相對濃縮在低pH組分中，經過此步的預分離之後，抽提組分中的肽段，並用二氧化鈦色譜法進一步富集唾液酸糖肽，之後採用C18反相液相色譜線上電噴霧電離串聯質譜進行分離鑑定。採用此戰略，我們首次對大鼠肝臟蛋白質的唾液酸化糖蛋白/糖肽進行了大規模的研究鑑定，共鑑定到322個唾液酸化糖蛋白，包括582個唾液酸化糖肽和614個N-糖基化位點。目前，我們鑑定到的大鼠肝臟蛋白質唾液酸化糖蛋白/糖肽是規模最大的。固相pH梯度等電聚焦-二氧化鈦色譜富集法的建立是本項目的重要研究成果。該研究結果以研究論文的形式發表於糖生物學權威專刊glycoconjugate journal上。 糖蛋白定量是我們的重要研究目標。N-糖醯胺酶（PNGase F）在糖基化修飾研究領域的套用十分廣泛，PNGase F酶促18O標記定量技術已廣泛套用於糖蛋白定量。而長期以來，針對糖鏈的PNGase酶促18O標記定量始終沒有實現。為了徹底實現PNGase催化的N-糖鏈18O標記，我們嘗試在酶解完成後對N-糖鏈做進一步處理，發現當溶液pH調至酸性後，糖胺去氨基反應的平衡被打破，糖胺得以完全水解，實現了PNGase酶促的完全18O標記。在此基礎上，我們結合PNGase標記與trypsin標記，創新性地發展了18O4標記技術，即在H218O 體系中，trypsin和PNGase酶解完成後，肽段、糖基化位點、糖鏈同時實現18O標記，進而實現在一步實驗中，獲得蛋白質N-糖基化全方位的定量信息。我們套用該技術分析了與肝癌相關的免疫球蛋白G. 該技術是N-糖蛋白相對定量研究的有力工具，在定量糖蛋白質組學和定量糖組學領域具有潛在的套用價值和廣闊的發展前景。本研究結果發表於Analyst雜誌。
