《肝癌發生髮展過程中血清糖蛋白N-糖組的差異及意義》是依託上海交通大學，由康曉楠擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：肝癌發生髮展過程中血清糖蛋白N-糖組的差異及意義
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：康曉楠
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
血清N-糖組的特徵性變化往往與疾病進程的病理學改變密切相關，源於組織病理學改變的特異性血清N-糖組作為疾病的糖生物標誌物並用於疾病的預警或早診是糖生物學套用領域的一個熱點。本研究以肝癌演進過程為研究主體，採用成熟的N-聚糖富集、質譜分析和鑑定技術（MALDI-obitrap-MS和MALDI-FITCR-MS）以及凝集素晶片技術分析正常人、肝炎、肝硬化與肝癌病人血清N-糖組的變化，發現和鑑定差異寡糖結構；並與肝硬化和肝癌組織的N-糖組相比較和對接，套用特徵性糖基轉移酶、糖基水解酶、核糖轉運子晶片及有關技術，確認血清N-糖組改變的分子基礎；從組織生理和細胞水平全面闡釋肝癌發生時血清N-糖組的變化和意義。
結題摘要
肝癌發展過程中糖鏈變化具有一定規律，本研究通過MALDI-TOF-MS分析血清糖蛋白N-糖鏈變化，運用凝集素晶片、糖基轉移酶基因晶片以及RNA干擾技術從組織、細胞以及肝癌細胞上皮間質轉化模型（EMT）水平探索差異糖鏈產生的分子基礎以及生物學意義：（1）血清糖蛋白Ｎ糖鏈釋放、純化後通過MALDI-TOF-MS分析發現核心岩藻糖、平分型糖鏈結構、唾液酸在肝癌中增加；凝集素晶片分析與肝癌組織和癌旁組織之間差異性糖鏈變化並通過凝集素印記實驗驗證，部分特異性糖鏈與血清變化一致；IPA分析凝集素MAB特異性親和糖蛋白與細胞增殖和生長相關；（2）在細胞水平上，高轉移潛能的細胞核心岩藻糖、平分型葡萄糖胺、α2-3連結唾液酸結構和/或N-乙醯葡糖胺結構的增多以及末端β1-4連結半乳糖結構的減少；誘導EMT之後肝癌細胞表面出現末端和核心岩藻糖、高甘露糖、N-乙醯葡萄糖胺、β 1,6分支和複雜型寡糖分支結構增多，而黏蛋白T/Tn抗原、平分型N-乙醯葡萄糖胺、α 2,6唾液酸和末端α或β連線的N-乙醯半乳糖胺結構減少；核心岩藻糖、平分型葡萄糖胺的變化在血清、組織、細胞以及EMT模型中變化一致，與腫瘤進展和惡性程度相關。（3）通過RNA干擾技術研究轉移相關糖基轉移酶β3GalT5的功能，發現其對肝癌細胞的增殖、凋亡、細胞周期都沒有顯著影響，而細胞的黏附減少，細胞的侵襲運動能力減弱。由於β3GalT5是合成sialyl lewis a結構的關鍵分子，基因沉默後sialyl lewis a合成減少，與黏附分子選凝素的結合可能減弱從而抑制了HCCLM3細胞的黏附及侵襲遷移能力。 結論： （1）運用MALDI-TOF-MS建立了肝癌、肝病及正常人的血清糖蛋白N糖鏈譜圖； （2）凝集素晶片和糖基轉移酶晶片結果證實血清差異糖鏈的結構部分與肝癌組織特異性差異糖鏈結構相一致：如核心岩藻糖、平分型糖鏈結構； （3）與疾病進程相關的差異性糖鏈結構在不同轉移潛能肝癌細胞系以及肝癌細胞誘導EMT過程中存在一致性變化； （4）干擾腫瘤惡性相關的糖基轉移酶β3GalT5可以抑制細胞的黏附和腫瘤細胞侵襲轉移能力，對細胞的增殖、凋亡、細胞周期沒有顯著影響，β3GalT5可以作為抗肝癌轉移的候選靶點。
