肝再生過程中質膜微區蛋白質及複合物動態變化研究

《肝再生過程中質膜微區蛋白質及複合物動態變化研究》是依託湖南師範大學，由陳平擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：肝再生過程中質膜微區蛋白質及複合物動態變化研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：陳平
• 依託單位：湖南師範大學

項目摘要

肝臟是具有極強再生能力的器官, 研究並闡明肝再生的機制可為肝移植等與肝損傷相關的疾病治療提供理論依據，具有重要的臨床意義和社會價值。脂筏是一種特殊的膜結構微區,具有參與胞吞胞飲、信號轉導等重要功能。在細胞信號刺激下，脂筏能改變蛋白質的大小和組成，有助於特異的蛋白質與蛋白質之間的相互作用，從而導致信號轉導通路的激活。肝再生過程中，隨著血管生成以及細胞增殖的啟動，質膜微區脂筏蛋白質將受到內部調控機制的影響而發生變化，捕獲脂筏微區信號蛋白分布的動態變化對於理解和闡明肝再生過程中信號傳導機制、信號通路途徑等有著重要的意義。本項目擬通過研究大鼠2/3肝部分切除後在0、24、48、72hr時間點微區脂筏蛋白質及其複合物在肝再生過程中的定位變化、蛋白質數量上的變化和自身修飾的變化，闡述肝臟再生過程中質膜微區蛋白質的改變對信號傳導、信號通路的影響，為探討肝再生這一生理現象的發生髮展機制提供理論依據。

結題摘要

肝臟是具有極強再生能力的器官, 研究並闡明肝再生的機制可為肝移植等與肝損傷相關的疾病治療提供理論依據，具有重要的臨床意義和社會價值。脂筏是一種特殊的膜結構微區,具有參與胞吞胞飲、信號轉導等重要功能。在細胞信號刺激下，脂筏能改變蛋白質的大小和組成，有助於特異的蛋白質與蛋白質之間的相互作用，從而導致信號轉導通路的激活。肝再生過程中，隨著血管生成以及細胞增殖的啟動，質膜微區脂筏蛋白質將受到內部調控機制的影響而發生變化，捕獲脂筏微區信號蛋白分布的動態變化對於理解和闡明肝再生過程中信號傳導機制、信號通路途徑等有著重要的意義。本研究中，我們成功構建了高重複性的2/3部分肝切除模型，並且最佳化了兩步膠原酶灌注分離再生肝實質細胞方法，分離得到高純度高成活率的再生肝實質細胞。通過提取純化肝切除後0小時，24小時，48小時，72小時的肝臟實質細胞的質膜，在此基礎上進一步純化得到了高質量的質膜微區及其脂質筏蛋白質，質譜鑑定結果顯示獲得了高可信度的微區蛋白質，表明本研究中富集肝實質細胞的方法為肝再生過程中質膜微區蛋白質的功能研究奠定了基礎。隨後通過對肝再生不同時間點的微區蛋白質進行itraq標記定量，我們獲得了肝再生過程中質膜微區蛋白質的動態變化圖譜。其中在四個時間點同時存在且差異顯著的蛋白有277個，鑑定的差異顯著的蛋白質主要參與信號傳導、蛋白質轉運和細胞連線等。蛋白質翻譯後修飾在生命體中具有十分重要的作用，它使蛋白質的功能更為完善，調節更為精細。本研究運用一種特異性磷酸化蛋白染色的磷酸化蛋白分析技術，對磷酸化蛋白的動態變化進行了比較分析。同時利用建立的兩種富集糖蛋白的方法（即生物素醯肼富集糖蛋白與生物素/親合素富集糖蛋白），對肝切除後72小時後及其假手術組的肝臟血竇內皮細胞質膜糖蛋白進行了富集提取以及質譜鑑定分析。我們一共鑑定到150個糖蛋白中的231個糖基化位點，其中細胞表面抗原分子鑑定到23個，通過生物信息學分析揭示所鑑定到的蛋白大部分已知且與內皮細胞的生理及病理進程密切相關。我們的研究結果為探討肝再生這一生理現象的發生髮展機制提供了理論依據。