《組蛋白甲基化酶SMYD3在調節卵巢癌種植轉移中的作用》是依託復旦大學，由馮煒煒擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：組蛋白甲基化酶SMYD3在調節卵巢癌種植轉移中的作用
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：馮煒煒
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
卵巢癌細胞從原發灶脫落，在腹水中形成懸浮球體是發生種植轉移的第一步,但迄今機制還有多處未明。本課題組前期研究發現在2D到3D培養的轉換中，球體細胞增殖能力降低，但粘附侵襲能力增強，組蛋白甲基化酶SMYD3可能通過調控integrin基因家族參與調控這一過程。本研究擬圍繞SMYD3-H3K4me3-integrin-下游相關分子 通路，探討SMYD3介導的integrin基因組蛋白甲基化影響卵巢癌種植轉移的分子機制。 計畫在體外利用CRISPR、質粒轉染、粘附和侵襲抑制試驗、ChIP等技術，明確SMYD3對細胞表型改變的影響、確定integrin基因家族及其作用靶點、證明SMYD3 是integrin發揮功能的關鍵調控因素，並探索其調控機制；之後在裸鼠人卵巢癌腹水瘤模型、臨床病人標本和SCID小鼠xenopatients模型中驗證這一通路，為開發卵巢癌種植轉移新的治療靶點提供理論基礎。
結題摘要
卵巢癌細胞從原發灶脫落,在腹水中形成懸浮球體是發生種植轉移的第一步,但迄今機制還有多處未明。本課題主要圍繞SMYD3-H3K4me3-integrin-下游相關分子通路,探討SMYD3介導的integrin基因組蛋白甲基化影響卵巢癌種植轉移的分子機制。我們首先通過3D培養模擬卵巢癌原發灶細胞脫落到腹水中形成球體的過程，在此過程中我們發現球體細胞的增殖能力降低但是侵襲粘附能力增強。同時我們發現組蛋白甲基化酶SMYD3在球體中升高並伴隨著H3K4me3的表達升高。我們用瞬時轉染siRNA,建立shSMYD3的穩轉株以及用SMYD3的小分子抑制劑BCI－121 來降調SMYD3，導致球體的侵襲和黏附能力降低。通過基因表達晶片的篩選發現受SMYD3調控的下游靶基因是整合素Integrin 家族。利用integrin的抗體進行粘附和侵襲抑制試驗發現ITGB6和ITGAM介導了這一過程，進一步在下調了SMYD3的細胞株中轉染SMYD3、ITGB6、ITGAM 可以恢復球體的侵襲和黏附能力，而在下調了ITGB6和ITGAM的細胞轉染SMYD3質粒不能恢復侵襲和轉移，說明了SMYD3的作用必須通過ITGB6和ITGAM來介導。通過ChIP等技術,明確了SMYD3結合在ITGB6和ITGAM啟動子區，使H3K4三甲基化，而這種結合在球體細胞中強於單層細胞。SMYD3 的表達和Integrin 介導的黏附能力的增加也在裸鼠卵巢癌腹水瘤和上皮性卵巢癌的腹水球體細胞中得到證實。利用慢病毒轉染的方法在卵巢癌腹水瘤和一個PDX模型中下調SMYD3，抑制了腫瘤轉移和腹水形成。在臨床標本中我們也證實了腹水腫瘤細胞和原發灶相比SMYD3和ITGB6和ITGAM的升高。綜上，我們的研究發現卵巢癌細胞從原發灶脫落形成腹水細胞球的過程由SMYD3調控，SMYD3促進球體細胞的黏附和侵襲，此過程由於使ITGB6和ITGAM的啟動子H3K4三甲基化，導致ITGB6和ITGAM表達增加引起。本研究結果為開發卵巢癌種植轉移新的治療靶點提供理論基礎。
