組織培養(組織培養物)

組織培養是將生物的部分組織從本體分離而進行培養。

組織培養(組織培養物)tissuc culture c}7分離出的組織的保存或培養。也指由適當裂 解的組織得到的單個細胞群體的保存或培養。也稱細 胞培養(coal culture) o ( 2 }被保存或培養的任何細胞 群體。 組織(細胞)培養廣泛用於病毒培養、癌的研究、免 疫學和毒理學等方面,也用於培養某些細菌〔例如衣原 體屬[Ghdamyd#a),立克次氏體屬( Ricke6tsia月。組織 培養要在無菌條件下操作。 在單層(mpnolayCr)培養中,單個的〔非聚集的) 細胞群體生長在合適的表面上,形成匯合層(厚度為一 個WACS)o肉跟觀察時,單層似乎是一層半透明膜。原始細胞懸液可以來自任何一種動物組織—包括人和其他靈長類動物,也常常用腎、瘤和胚組織.
培養容器包括醫用平皿,洛克斯瓶,試管和萊頓瓶等。大部分容器是由中性p}I的玻璃製作的,但也有採用某些塑膠(例如聚藝乙烯)的。
培養基(medium). (1)生長培養基(growthmedium)(例如Eagle培養基)可供細胞生長和分裂。基本組成成分是平衡鹽溶液,並加有葡萄塘,合適的胺基酸,維生素以及血清和(或〕乳清蛋白水解液(如果出現污染,通常加抗生素。但連續加抑菌劑是不好的。應.u定期在無杭生素培養基上進行移植。以便檢查污染)。生長培養基中一也加人pH指示劑(如酚紅)和緩衝系統(例如碳酸氫鹽,N-乙經乙基呱嗦_N}_2一乙烷磺酸》。(2)維持培養基}maintenaee medium)用來保持細胞群體的}a力私特性,同時使生長和分裂限制到最小限度。
單層培養物的製備。將選好的組織切成碎片,用30-330C的磷酸鹽緩衝生理鹽水(PB5)沖洗數次,然後放入含胰蛋白酶(D.D5-}0.1%WfV}的PBS液中進行捎化(在30一”0c下,機械攪拌20--3D分鐘〕(胰蛋白酶減弱細胞間的結合,過度消化將損傷細胞)。棄去棍濁韻上清液(含有被損傷的細胞)。然後將組織碎片置於新鮮gas-,}}白酶溶液中再次消化。將上清濃(含有單個的細胞和聚體小塊)離心(soo-1D}a轉/分.5分鐘)並將細胞沉澱物重新懸浮於生長培養基中。確定細胞濃度,並將懸浮液{用生長培養基)稀釋成約每毫升含1U}個細胞,再把足以形成一淺層的懸浮液加到培養容器中。例如,一個4盎司的醫用平皿需用約15毫升懸浮液。培養期間〔哺乳動物細胞為370C} ),細胞附著在j.}養容器內表面,通過生長和分裂,在幾天、一周或更長時間內形成匯合的單層〔醫用平皿培養在其側而上,試管或橫切面為圓形的瓶子則焙養在一個轉軸裝置接近水平位置上。容器繞長軸旋轉每分鐘不到一轉的速度,使得單層圍繞容器內壁發育而成相連的帶狀物〕。經過培養,動物細胞一般變為紡錘形或多角形。
傳代(subculture)a首先使細胞脫散(即從生長表面分離),用脫散劑[例如含維爾烯(}ersen司O,。2-.}. 45 0%和胰蛋白酶0.1%的PBS]處理單層1一2分鐘,傾出脫散劑以後,將分散的細胞重新懸浮於新鮮的生長培養基中。這種細胞懸浮掖(在合適的細胞濃度下)可用來製備新鮮培養物。在冰凍等條件下,細胞能保存較長時間。
轉化(transformation) q在傳代一定次數以後,細胞或者逐漸死亡,鹹者發育成確立細胞株(establishedcell lin帥。確立細胞株的細胞都是異倍休。培養出的細胞的特徵可用免疫學方祛、或由檢查細胞的核型來定,後者涉及到把有絲分裂〔例如用秋水仙素處理)阻止在中期階段並檢查染色體。

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