組織分離

組織分離是一種用子實體的某一部分來分離菌種的方法。常套用於臨床手術、食品加工、組織取締等途徑。

基本介紹

• 中文名：組織分離
• 學科：生物學
• 技術屬性：無性繁殖或克隆技術
• 套用領域：批量生產

組織分離的含義

名稱：	組織分離	學科：	生物學
原理：	用子實體的某一部分來分離菌種的方法	技術屬性：	無性繁殖或克隆技術
用途：	臨床手術、食品加工、組織取締	套用領域：	批量生產

從理論上講：所獲菌種不發生遺傳重組等變異，因此常被生產上採用。選擇無污染並菇形健壯的蘑菇幼菇(6分成熟)，採摘後及時放入滅過菌的紙袋中帶回接種室，連同母種用試管培養基等用品一起放入接種箱內消毒。在接種箱內無菌操作，先用75%的酒精消毒雙手和工具，然後用0.1%升汞液消毒種菇表面，用消過毒的解剖刀從菌蓋與菌柄聯結處的中部縱切開，在菌蓋與菌柄交界處切成長條形小塊，用接種鉤鉤取小塊菌肉，迅速接入培養基斜面的中部，塞好棉塞，在25℃下培養3～5天后即可看到組織塊周圍長出白色稀疏纖細的菌絲，15～18天菌絲即可長滿試管，挑選菌絲健旺無污染的菌管再進行轉接擴繁，須經出菇試驗合格後用於生產。

組織分離法簡便，後代不易發生變異，能保持原菌株的優良特性。組織分離最好採用正處於旺盛生長中的幼嫩子實體或菇蕾作為分離材料，採取菌蓋與菌柄交接處的組織進行分離，效果最好，對於那些有內或外菌幕保護的菇類來說,取在菌幕保護下的幼嫩菌褶接種，生活力更加旺盛。對於某些菌根菌，則取用靠近基部的菌柄組織才能成活。

常用分離方法

子實體分離

種菇要選朵大蓋厚，柄短，八九分成熟的優良品種。切去菇兩基部，在無菌箱內以0.1%的升汞水浸幾分鐘，再用無菌水沖洗並揩乾或用75%酒精棉球擦拭菌蓋與菌柄2次，進行表面消毒。

接種時，只要將種菇撕開，在萌蓋和菌柄交界處或菌褶處，挑取一小塊組織；移接 到PDA培養基上。置25℃左右溫度下培養3-5天，就可以看到組織上產生白色絨毛狀菌絲，轉管擴大即得到菌種。

如香菇、平菇等可以用此方法。

菌核分離

茯苓、豬苓、雷丸等菌的子實體不易採集。而常見的是它貯藏營養的菌核。用菌核分離，同樣可以獲得菌種。方法是將菌核表面洗淨，用酒精或升汞消毒後，切開菌核，取中間組織一小塊，約黃豆大小，接種在PDA 培養基斜面上，保溫培養。

應注重的是，菌核是貯藏器官，大部分是多糖類物質，只含有少量的菌絲，因此挑取的組織塊要大一些，假如組織塊過小，則不易分出菌種。

菌素分離

有一部分子實體不易找到，也沒有菌核，可以用菌素進行分離。如蜜環菌、假蜜環菌。

其操作方法是先用酒精或升汞將菌素表面黑色皮層輕輕擦拭2～3次， 然後去掉黑色外皮層（菌鞘），抽出白色菌髓部分；用無菌剪刀將菌髓剪一小段，接種在培養基上，保溫培養，即得該菌菌種。

菌素分離要注重：因菌素比較細小，分離素也比較細小，分離時極易污染雜菌，所以要嚴格操作。

案例

1.著名的黑木耳菌種“菊三”、“冬梅1號”、“雪梅1號”、“雪梅3號”、“984”就是黑龍江省柴河食用菌學會冬梅食用菌廠，通過對野生木耳組織分離，馴化選育成功的。

2.香菇組織分離方法

選用的子實體先經0.1%開汞水或70%酒精表面消毒後。用無菌水沖洗並用無菌紗布擦去表面水分。

分離香菇時，用無菌解剖刀自菌柄處切開少許，再用手將子實體掰開為二，在菌蓋與菌褶交界處，切取0.3～0.4立方厘米的一小塊菌肉，移放在斜面培養基中央。如已開傘的種菇、則選菌蓋與菌柄交界處的菌肉。

分離草菇時，用無菌解剖刀把菌蕾縱切少許；再用手把菌蓋輕輕剝開，在菌柄上方和菌蓋交界處，切取1～5毫米的細塊，接在斜面培養基中。如種菇已受雨淋，吸水較多，應取菌褶作為接種材料。組織分離後將試管外面放在恆溫箱中培養。待組織塊周圍萌發出菌絲，並向 培養基蔓延生長後，再挑取生長健壯的菌絲進行轉管培養。

組織分離法操作簡便，又不易帶入雜菌，容易獲得純菌種。但對銀耳、黑木耳等膠質菌；因其子實體中菌絲的含量極少，如用組織分離培養，則往往不易成功。