細胞破碎法

細胞破碎的三種方法。(1)酸鹼處理:調節pH值,改變蛋白質的荷電性質,提高產物的溶解度。 (2)化學試劑處理:用表面活性劑或有機溶劑(甲苯)處理細胞,增大細胞壁的通透性,降低胞內產物的相互作用,使之容易釋放。 (3)酶菌溶:利用溶解細胞壁的酶處理菌體細胞,使細胞壁受到部分或完全破壞後,再利用滲透壓衝擊等方法破壞細胞膜,進一步增大胞內產物的通透性。 酶溶的優點:操作溫和,選擇性強,酶能快速地破壞細胞壁,而不影響細胞內含物的質量,但缺點是酶的費用高,因而限制了它在大規模生產中的套用。 化學滲透法與機械破碎法相比:速度低,效率差,且化學或生化試劑的添加形成新的污染,給進一步的分離純化增添麻煩。但化學滲透法選擇性高,胞內產物的總釋放率低,可有效抑制核酸的釋放,料液粘度小,有利於後處理。

基本介紹

  • 中文名:細胞破碎法
  • 破碎方法1:機械破碎
  • 破碎方法2:化學和生物化學滲透(非機械法)
  • 破碎方法3:物理滲透法
  • 所屬類型:生物技術
  • 目的:使細胞破碎,取得所需物質
機械破碎,物理滲透法,

機械破碎

機械破碎處理量大、破碎效率高、速度快,主要靠均質作用和球磨碾磨作用;操作時,細胞遭受強大的機械剪下力而被破碎。採用機械法,發熱是一個主要問題。
細胞的機械破碎主要有高壓勻漿、珠磨、撞擊破碎和超音波破碎等方法。
(1) 高壓勻漿器的破碎原理:細胞懸浮液在高壓作用下從閥座與閥之間的環隙高速(可達到450m/s)噴出後撞擊到碰撞環上細胞在受到高速撞擊作用後,急劇釋放到低壓環境,從而在撞擊力和剪下力等綜合作用下破碎。操作壓力通常為50~70Mpa。影響因素:壓力、循環操作次數和溫度。
高壓勻漿法適用於酵母和細菌細胞的破碎。
(2)珠磨:利用固體間研磨剪下力和撞擊使細胞破碎。是最有效的一種細胞物理破碎法。珠磨機的主體一般是立式或臥式圓筒形腔體。磨腔內裝鋼珠或小玻璃珠以提高碾磨能力,一般,臥式珠磨破碎效率比立式高,因為立式機中向上流動的液體在某種程度上會使研磨珠流態化,降低其研磨效率。
珠磨法破碎細胞分為間歇或連續操作。珠磨法操作的有效能利用率僅為1%左右,破碎過程產生大量的熱能。設計時要考慮換熱問題。珠磨的細胞破碎效率隨細胞種類而異,適用於絕大多真菌菌絲和藻類等微生物細胞的破碎。與高壓勻漿法相比,影響破碎率的操作參數較多,操作過程的最佳化設計較複雜。
(3)撞擊破碎
原理:細胞是彈性體,比一般剛性固體粒子難於破碎。將彈性細胞冷凍使其成為剛性球體,降低破碎難度,撞擊破碎正是基於這樣的原理。
操作:細胞懸浮液以噴霧狀高速凍結(凍結速度為數千℃/min),形成粒徑小於50μm的微粒子。高速載氣(如氮氣,流速約300m/s)將凍結的微粒子送入破碎室,高速撞擊撞擊板,使凍結的細胞發生破碎。
特點:
①細胞破碎僅發生在與撞擊板撞擊的一瞬間,細胞破碎均勻,可避免反覆受力發生過度破碎的現象;
②細胞破碎程度可通過無級調節載氣壓力(流速)控制,避免細胞內部結構的破壞,適用於細胞器(如線粒體、葉綠體等)的回收。撞擊破碎適於微生物細胞和植物細胞的破碎。
(4)超音波破碎:利用液相剪下力破碎細胞。
機理:在超音波作用下液體發生空化作用,空穴的形成、增大和閉合產生極大的衝擊波和剪下力,使細胞破碎。
超音波破碎很強烈,適用於多數微生物的破碎,有效能利用率低,破碎過程產生大量的熱,對冷卻的要求相當苛刻,故不易放大,主要用於實驗室規模的細胞破碎。
影響因素:聲強、聲頻、溫度、時間、離子強度、pH、細胞類型。

物理滲透法

(1)滲透壓衝擊法
將細胞置於高滲透壓的介質中,使之脫水收縮,達到平衡後,將介質突然稀釋或將細胞轉置於低滲透壓的水或緩衝溶液中,在滲透壓的作用下,外界的水向細胞內滲透,使細胞變得腫脹,膨脹到一定程度,細胞破裂,它的內含物隨即釋放到溶液中。
適用於不具有細胞壁或細胞壁強度較弱細胞的破碎。
(2)凍結-融化法
機理:一是在冷凍過程中會使細胞膜的疏水鍵結構破裂,從而增加細胞的親水性;二是冷凍時胞內水結晶形成冰晶粒,引起細胞膨脹而破裂。
操作:將細胞急劇凍結至-20℃~-15℃,使之凝固,然後在室溫緩慢融化,此凍結-融化操作反覆進行多次,使細胞受到破壞。
缺點:反覆凍融會使蛋白質變性,從而影響活性蛋白質的回收率。
凍結-融化法適用於比較脆弱的菌體。

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