《精子發生中microRNA-184的調控、作用及機制研究》是依託上海交通大學，由伍靜文擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：精子發生中microRNA-184的調控、作用及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：伍靜文
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
在青年基金資助下，我們發現miR-184在睪丸中的表達水平具有年齡變化特點，定位於睪丸中生殖細胞；促進GC-1spg細胞增殖；通過抑制其靶基因Ncor2 mRNA的翻譯來發揮轉錄後調控作用。此部分研究結果已發表SCI論文1篇；參加國際會議1次，論文獲“Travel Award獎；參加國內會議1次，論文被選為分會報告。在這些研究工作的基礎上我們想進一步了解導致miR-184在睪丸特異表達模式的機制；miR-184在體內的生物學功能及miR-184調控精子發生的機制。因此，本項目擬開展三部分研究工作。第一：miR-184基因啟動子分析，確定與miR-184基因啟動子區結合的睪丸特異轉錄因子，從而明確導致miR-184在睪丸特異表達模式的機制；第二：採用構建miR-184轉基因小鼠的方法在體研究其功能；第三：通過鑑定與分析睪丸中miR-184的所有靶基因來明確miR-184調控精子發生的機制。
結題摘要
前期研究工作顯示miR-184 在睪丸中的表達水平具有年齡變化特點，定位於睪丸中生殖細胞；可促進GC-1spg 細胞增殖；可通過抑制其靶基因Ncor2 mRNA 的翻譯在精子發生中發揮轉錄後調控作用。因此我們想進一步了解導致miR-184 在睪丸特異表達模式的機制；miR-184 在體內的生物學功能及miR-184 調控精子發的機制。因此，本項目開展以下三部分研究工作：確定與miR-184 基因啟動子區結合的睪丸特異轉錄因子，從而明確導致miR-184 在睪丸特異表達模式的機制；採用構建miR-184 轉基因小鼠的方法在體研究其功能；通過鑑定與分析睪丸中miR-184 的所有靶基因來明確miR-184 調控精子發生的機制。 我們通過生物信息學方法預測mir-184啟動子區可能結合的轉錄因子，通過RT-qPCR、免疫組化（螢光）法確定與miR-184表達模式一致的轉錄因子Pax-5與Yy-1；進一步用過表達Pax-5與Yy-1法確定了這兩個轉錄因子可以促進miR-184的表達，提示Pax-5與Yy-1可能調控miR-184在睪丸中的時空特異性表達模式。通過採用受精卵雄原核注射構建miR-184轉基因小鼠（Ddx4-Tg-miR-184）。12隻首建鼠與野生型小鼠交配，其中只有1隻未獲得子代小鼠。其餘11隻首建鼠都可產生子代小鼠。每窩產仔數、附睪精子濃度及精子活動力、睪丸與附睪的組織學切片與對照野生型小鼠相比無顯著差異。以上實驗說明Ddx5-Tg-miR-184轉基因小鼠生殖系統沒有出現明顯表型。最後我們以Founder93號小鼠的子代雄鼠與WT雄鼠鼠腦組織做表達譜（DGE）測序，在上調的基因中利用miRNA靶基因預測軟體確定了miR-184的6個靶基因 。此外，我們檢測了miR-184在不育男性患者血清中的表達水平，結果顯示miR-184在不育男性患者血清中的表達水平大大下降，提示血清中miR-184的表達水平可以作為衡量男性生育力的可能指標之一。 通過本課題研究，明確了miR-184 在睪丸中呈時空特異表達模式的機制；明確了通過雄原核注射構建的Ddx4-Tg-miR-184轉基因小鼠生殖系統沒有出現明顯表型；篩查出miR-184的6個靶基因；提示血清中miR-184的表達水平可以作為衡量男性生育力的可能指標之一。
