《microRNA-184在精子發生中的作用及分子機制》是依託上海交通大學，由伍靜文擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA-184在精子發生中的作用及分子機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：伍靜文
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
小RNA分子在精子發生過程中所發揮的轉錄後調控作用正日益受到研究者們的關注。MicroRNAs是一種在生物的生殖、發育、衰老及死亡過程中發揮重要作用的小RNA分子。研究表明，microRNA-184（miR-184）是主要表達於睪丸與腦組織中的一種microRNA，且在睪丸中的表達量遠高於腦組織，但miR-184與哺乳動物精子發生的關係目前尚不清楚。本課題擬探討miR-184在精子發生中的作用及分子機制。首先檢測體外培養生精細胞中過表達或抑制表達miR-184後其生物學性狀的改變，以及觀察經睪丸輸出小管注射miR-184或其抑制劑anti-miR-184後對精子發生的影響來探討miR-184在精子發生中的作用；然後通過檢測miR-184的靶基因來探討miR-184調節精子發生的分子機制。為闡明miR-184在精子發生中的作用提供實驗依據，並可能為臨床上不育的診療帶來新思路。
結題摘要
小RNA分子在精子發生過程中所發揮的轉錄後調控作用正日益受到研究者們的關注。MicroRNAs是一種在生物的生殖、發育、衰老及死亡過程中發揮重要作用的小RNA分子。研究表明，microRNA-184（miR-184）是主要表達於睪丸與腦組織中的一種microRNA，且在睪丸中的表達量遠高於腦組織，但miR-184與哺乳動物精子發生的關係目前尚不清楚。本課題擬探討miR-184在精子發生中的作用及分子機制。首先採用定量PCR和原位雜交方法檢測miR-184在不同年齡小鼠睪丸中的表達水平及定位，結果表明miR-184在睪丸中的表達水平具有年齡變化特點，且miR-184定位於睪丸中從精原細胞到圓形精子細胞的所有生精細胞中。繼而我們採用在生殖細胞系GC-1spg中過表達miR-184的方法，體外研究miR-184的生物學功能。結果表明miR-184促進GC-1spg細胞的增殖。進一步，我們通過生物信息學預測、雙螢光素酶報告基因檢測以及Western-blot的方法驗證了miR-184的靶基因。報告基因檢測發現miR-184通過互補結合Ncor2 mRNA 3'-非翻譯區下調其表達，Western-blot檢測發現過表達miR-184可下調內源性NCOR2蛋白的表達，說明Ncor2是miR-184的靶基因。最後，我們用定量PCR法結合Western-blot方法證明miR-184是通過抑制Ncor2 mRNA的翻譯而不是通過降解Ncor2 mRNA來發揮轉錄後調控作用。簡而言之，該項目確定了miR-184在睪丸中的特異表達模式、體外驗證了其功能、鑑定了miR-184的一個靶基因。這些結果提示，miR-184在精子發生中發揮作用。
