《移植抗體CDR2F9及其抗膿毒症的作用機制研究》是依託浙江大學，由寧鉑濤擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：移植抗體CDR2F9及其抗膿毒症的作用機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：寧鉑濤
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
在上個青年基金資助下，我們獲得了穩定的Hela-CD14細胞株及高活性的抗人CD14嵌合抗體Ch2F9。但是，Ch2F9隻是部分人源化抗體，保留了30%鼠源性，臨床上反覆套用，會產生較多的副作用，如HACA和HAMA等。與嵌合抗體比較，CDR移植抗體不僅最大程度的保留了抗體的反應源性，更是去除了90%以上的鼠源性蛋白，從而使抗體的免疫源性進一步降低。CD14不僅是診斷急性單核細胞白血病（M5）的重要標誌，更是革蘭陰性菌感染和LPS刺激所致的炎症風暴起始和關鍵分子。P2A蛋白肽是來自手足口病病毒的、能自我降解的13肽，UCOE啟動子是較CMV和SV40啟動子更高效的真核啟動子。我們擬通過一系列的基因克隆方法，以P2A為連線肽，UCOE為啟動子表達2F9的CDR移植抗體（CDR2F9），並通過體外體內實驗研究CDR2F9抗膿毒症和全身炎反應綜合徵（SIRS）的作用機制。
結題摘要
CD14在LPS的致炎過程中的起著關鍵作用，如何對其進行人為的調控，已成為抗內毒素治療研究的重要領域之一。在發生膿毒症或感染性休克時，阻斷CD14的功能，可以抑制機體對病原微生物的固有免疫反應。我們認為抗人CD14單克隆抗體2F9的一系列基因工程抗體是治療膿毒症和全身炎症反應綜合症（systemic inflammatory response syndrome ，SIRS）等CD14相關性疾病的重要生物治療手段。與人鼠嵌合抗體比較，CDR（complementary domain region, CDR）移植抗體不僅最大程度的保留了抗體識別和結合特異性抗原的能力，更是去除了90%以上的鼠源性蛋白序列，從而使抗體的免疫源性得到進一步降低。 該項目完成目標載體的構建以及在CHO細胞高效且穩定表達目的基因工程抗體的真核表達系統；獲得高親和力的CDR2F9抗體，其分子大小約約160 kDa；通過動物實驗證實CDR2F9在膿毒症有一定的治療作用。陽性對照注射1500μg/kg的LPS，陰性對照注射0.5ml無菌生理鹽水，Hu2F9治療組注射1500μg/kg的LPS和1μg的Hu2F9，治療組在第四周小鼠存活率仍然有80%，而陽性對照組全部死亡，觀察到目的抗體對LPS誘導的膿毒症小鼠具有治療作用。Hu2F9可能部分下調TLR4和5的表達，從而使IL-6、10和TNF-α均出現不同程度下降，治療組對比陽性對照組IL-6、10和TNF-α均有統計學差異（P＜0.05）。Hu2F9可能通過與LPS競爭CD14結合位點，從而減輕全身炎症反應綜合徵以及細胞因子的表達。該項目初步研究了Hu2F9在LPS誘導的膿毒症中的治療作用，為膿毒症的生物介質治療，比如免疫吸附柱的體外血液淨化治療膿毒症、人源化抗體阻斷革蘭陰性菌的全身炎症反應等提供了研究基礎。後期仍然需要對該抗體的表達體系進一步完善，提高表達效率，對其在LPS誘導的膿毒症中的治療機制以及免疫原性等副作用展開進一步的研究。
