禽流感診斷技術

禽流感診斷技術滿足了我國禽流感流行病學監測及現地診斷與防制的迫切需要。

基本信息

禽流感亞型眾多加上基因突變、重組和重排，使其變異極快，導致毒株的致病性也千差萬別，早期快速診斷和血清學監測無疑是預防、控制禽流感的前提條件，我國動物流感研究中心（AIRC）在近幾年時間內相繼建立了禽流感瓊脂擴散（AGP）、血凝抑制試驗（HI）、神經氨酸酶抑制試驗（NI）、間接酶聯免疫吸附試驗（ELISA）等血清學診斷技術以及分子診斷技術（RTPCR）。滿足了我國禽流感流行病學監測及現地診斷與防制的迫切需要。

診斷技術

禽流感血清學診斷技術

我國分別製備了自己的覆蓋H1-H15和N1-N9的標準診斷及分型抗原和血清，並以此為基礎，建立了禽流感血凝抑制（HI）及神經氨酸酶抑制試驗（NI）方法，其高度的特異性和準確性，有力地保障了我國禽流感毒株的分離與鑑定；此外，建立的禽流感AGP診斷技術及其診斷試劑盒，在全國範圍推廣套用取得良好效果的同時，還以重組桿狀病毒在昆蟲細胞中表達的禽流感病毒核（NP）蛋白取代了原有的全病毒抗原，提高了診斷的敏感性及抗原的生物安全性，降低了試劑盒成本，簡化了工藝；我國建立的禽流感間接酶聯免疫吸附試驗（AIV-ELISA）診斷技術及禽流感抗體斑點-ELISA診斷技術，既可用於禽流感的早期診斷，又可用於抗體的監測，可有效地檢測到感染後3～4天的抗體反應，陽性全檢出期至少114天，其中的禽流感抗體斑點-ELISA診斷技術，結果易於判定，增加了ELISA方法在現在禽流感抗體監測及流行病學調查中的適用性，利用該兩項技術研製的試劑盒，具有敏感性高，特異性強，檢出時間早，檢出持續期長，速度快等特點，便於大批量檢測；鑒於對禽流感的生物安全性要求，AIRC還建立了以重組桿狀病毒在昆蟲細胞中表達的禽流感病毒保守結構蛋白NP取代ELISA試劑盒中原來的全病毒抗原的ELISA診斷技術（RNP-ELISA），試驗表明，除具有與全病毒間接ELISA（AIV-ELISA）同樣的特異性和敏感性外，還具備了抗原製備工藝簡單、生物安全性高、成本低廉、易於大批量生產等優點，套用此項技術研製的診斷試劑盒，經田間試驗也取得了很好的效果。

禽流感分子診斷技術

近幾年發展起來的RT-PCR分子診斷技術可以從基因水平檢測禽流感RNA基因，具有高度的敏感性和特異性，並且可大大地縮短對AI病毒的檢出時間，克服了傳統的禽流感診斷技術包括病毒分離鑑定試驗周期長的缺點，為禽流感早期快速診斷提供了敏感、快速、實用的檢測方法。目前，我國通過設計合成AIV核蛋白（NP）基因特異的引物，建立了可以直接從臨床病料的感染組織中檢測所有亞型禽流感病毒的RT-PCR診斷技術，經試驗表明，可套用於對所有亞型禽流感感染的早期快速診斷，具有敏感、特異、快速的特點；另外，為特異、快速地檢出可引起高致病力禽流感大爆發的H5或H7亞型禽流感病毒的感染，我國還建立了對臨床病料或雞胚接種物中H5和H7亞型禽流感病毒進行快速分型檢測RT-PCR診斷技術；此外，H5和H7亞型禽流感病毒分子分型診斷技術在特異地檢出H5或H7亞型禽流感病毒感染的同時，還可根據套用特定引物經RT-PCR擴增出的H5和H7包括裂解位點在內的HA基因片段，經測序推導出的胺基酸序列來判斷H5或H7亞型禽流感病毒的致病性高低，在為我國禽流感尤其是高致病力禽流感的防制提供先進、有效的早期快速診斷技術和監測手段的同時，也為高致病力禽流感防制爭取到極為寶貴的快速反應時間。
[摘自於震康付朝陽崔尚金步志高唐秀英]