示蹤慢病毒

背景介紹：

外泌體特指直徑在30-150nm的盤狀囊泡，其主要來源於細胞內多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合後釋放到胞外基質中。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族（CD63, CD81 和CD9）、熱休克蛋白家族（HSP60, HSP70和HSP90），本示蹤病毒使用CD63作為生物標記，通過將CD63與螢光蛋白偶聯，帶螢光的膜蛋白會在表達至外泌體膜上，便於後續進行、觀察內化或其他實驗。

基本介紹

• 中文名：示蹤慢病毒
• 外文名：Tracing(exosome) lentivirus                    

一、背景介紹：

外泌體特指直徑在30-150nm的盤狀囊泡，其主要來源於細胞內多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合後釋放到胞外基質中。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族（CD63, CD81 和CD9）、熱休克蛋白家族（HSP60, HSP70和HSP90），本示蹤病毒使用CD63作為生物標記，通過將CD63與螢光蛋白偶聯，帶螢光的膜蛋白會在表達至外泌體膜上，便於後續進行、觀察內化或其他實驗。

CD63-tdTomato標記示蹤exosome感染HUVEC細胞

Exosome 示蹤慢病毒	總量
ExoPerfect exo-CD63-GFP 慢病毒	5X10^7TU
ExoPerfect exo-CD63-RFP 慢病毒	5X10^7TU

二、使用方法：

1. 準備細胞

將狀態良好的目的細胞接種到24孔板中，細胞計數後，進行鋪板，每孔加入適量培養基。

2. 病毒感染，換液

根據細胞MOI值來計算並加入適量示蹤病毒。添加感染增強劑polybrene，保證終濃度為5ug/ml，感染8~12小時後，觀察細胞狀態，並更換無外泌體血清的培養基繼續培養24-72小時後，提供細胞上清也進行外泌體抽提，此外泌體即帶有螢光標記，可供後續外泌體感染目的細胞，並通過雷射共聚焦查看目的細胞螢光進行示蹤。

三、保存條件：

可-80°C 長期保存，不可反覆凍融。