磷酸酶是一種單磷酸脂的水解酶，可使單磷脂水解，其反應可根據反應基質的不同而異，如用磷酸酚酞為基質，經磷酸酶水解後釋放出酚酞，在鹼性環境中可呈紅色，根據其顯色反應，可以鑑別致病性葡萄球菌與其他葡萄球菌的存在等。
基本介紹
- 中文名：磷酸酶試驗
- 外文名：phosphatase test
- 磷酸酶本質：一種單磷酸脂的水解酶
- 反應實質：顯色反應
- 套用：鑑別致病性葡萄球菌等
- 結果判斷：菌落變為紅色者為陽性
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磷酸酶
磷酸酶（phosphatase）是一種能夠將對應底物去磷酸化的酶，即通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團除去，並生成磷酸根離子和自由的羥基。磷酸酶的作用與激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，將磷酸基團加到對應底物分子上。在許多生物體中都普遍存在的一種磷酸酶是鹼性磷酸酶。
酸性磷酸酶(acid Phosphatase，ACP)是一種在酸性條件下催化磷酸單酯水解生成無機磷酸的水解酶，其催化反應的性質和ALP類似，最適pH5—6。ACP主要分布於人體的前列腺、肝、脾、乳汁、紅細胞、血小板及骨骼等組織和器官中，以前列腺含量最為豐富。而正常人血清中ACP主要來自骨、肝、腎、脾等組織，所以ACP含量無性別和年齡的差異。
穩定性：在室溫(20～25℃)下非常不穩定。
鹼性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP/AKP)是一種含鋅的糖蛋白，在鹼性條件中(最適pH為10)可以水解各種天然及人工合成的磷酸單酯化合物而釋放無機磷；同時又具有磷酸轉移酶的作用。ALP屬於同源二聚體蛋白，分子量為56kDa，每個單體由499個胺基酸組成：其廣泛分布於人體的肝臟、腎臟、骨骼、腸和胎盤等組織和器官中，肝臟中含量最豐富。正常成年人血清中ALP主要來源於肝臟和骨骼，生長期兒童血清ALP主要來自成骨細胞和生長中的骨軟骨細胞，少量來自肝臟組織。
半壽期：3d。
穩定性：室溫(20～25℃)和冰櫃(2～8℃)儲存均可使ALP活性升高，最好在採血當天分析。
磷酸酶試驗方法
(1)原理
(2)方法
取待檢菌接種於磷酸酚酞瓊脂平板上，置35℃孵育18～24h，於平皿蓋內加1滴濃氨水，熏蒸片刻，觀察結果。亦可用液體培養基，經孵育後，向管內加400g/L氫氧化鈉溶液1滴，觀察結果。
(3)結果
菌落變為紅色者為陽性。
(4)套用
主要用於致病性葡萄球菌與非致病性葡萄球菌的鑑別，前者為陽性，後者為陰性。
酸性磷酸酶試驗
原理：精液中的酸性磷酸酶，可分解磷酸苯二鈉，產生萘酚，萘酚經鐵氰化鉀的作用，與氨基安替比林結合，產生紅色醌類化合物。
試劑：枸櫞酸1.4g，IN氫氧化鈉2.5ml，磷酸苯二鈉0.2g，4-氨基安替比林0.6g，蒸餾水加至100ml。顯色劑：IN氫氧化鈉16.7ml，碳酸氫鈉1.4g，鐵氰化鉀3.6g，蒸餾水加至100ml。
方法：剪取檢材少許(0.1×0.1cm，最好取斑痕周圍部分，因該處酸性磷酸酶活性最高)，置試管內，加緩衝液3～5滴，徑37℃ 5～7分鐘後，再加顯色液3～4滴。
陽性反應為立即出現淺紅色至深紅色，精斑濃度過高，可出現紅色沉澱f陰性反應為橙黃色。該試驗靈敏度較高，但往往對妊娠者，或新鮮的陰道分泌物以及男性尿跡等也有陽性反應，因此檢驗時必須進行無斑痕處理和各種已知樣本的對照。
