《硝基油酸對急性腎臟損傷保護作用機制研究》是依託山東大學，由劉海英擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：硝基油酸對急性腎臟損傷保護作用機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉海英
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
硝基油酸是一種新的內源性活性小分子物質，它是內源性的硝基脂肪酸衍生物，在體內發揮重要的生理作用。我實驗室在近幾年開展了硝基油酸對腎臟損傷的保護作用研究工作，首先發現硝基油酸在腎臟缺血再灌注模型中對於腎臟有明確的保護作用，但其作用機制尚不明確。本研究主要研究在腎臟缺血再灌注模型中硝基油酸的腎臟保護作用是什麼，它的治療機制是否通過PPARγ的激活來完成，是否存在受體外的作用，硝基油酸是否可以在體內增加內源性的NO的形成，其內源性的NO的形成的機制是什麼，硝基油酸是否對eNOS的活性、表達及結構有調節作用，以及硝基油酸對增加內源性的NO的形成是否通過PPARγ的激活來完成來完成。OA-NO2作為內源性的硝基脂肪酸，可以顯著的保護腎臟功能，在體內含量豐富，導致水鈉瀦留的副作用小，是一種安全有效的理想藥物，通過本研究將進一步明確其作用機制，為其進入臨床套用提供理論基礎。
結題摘要
本研究探討硝基油酸（OA-NO2）改善缺血再灌注小鼠腎臟保護作用及作用機制。研究小組採用人腎小管上皮細胞系（HK-2）隨機分為正常組（Con組）、缺糖缺氧再灌注組（OGD/R組）及硝基油酸預作用的缺糖缺氧再灌注組（OA-NO2+OGD/R）；給藥組自損傷處理之前45min至損傷全過程中給予OA-NO2（1.25uM）作用。MTT法檢測細胞存活率，流式細胞術檢測細胞凋亡，Hoechst 33342染色檢測細胞核形態變化，Western Blot檢測caspase3、cleaved caspase3、PPAR以及線粒體組分和細胞質組分中Bax、Bcl2、細胞色素C（cyto C）、凋亡誘導因子（AIF）蛋白表達水平，免疫螢光檢測活化Bax的表達情況。採用siRNA和GW9662抑制PPAR γ活性以明確OA-NO2發揮作用的信號通路。研究結果顯示與正常組相比，缺糖缺氧16h再灌注3h（H16R3）組細胞存活率下降至48.88±3.13%（p＜0.01）；細胞凋亡率增加至27.11±1.29% （p＜0.01）；Hoechst 33342染色檢測發現細胞核緻密濃染、核碎裂增加，差異具有統計學意義；Western Blot檢測發現cleaved caspase3及cleaved PPAR蛋白水平明顯上升，細胞質中cyto C、AIF水平明顯上升，Bax水平明顯下降，免疫螢光檢測發現Bax明顯被激活，差異具有統計學意義。與H16R3組相比，給藥組可顯著提高細胞存活率至61.17±4.90%（p＜0.05）；細胞凋亡率降低至9.73±0.59%（p＜0.001）；Hoechst 33342染色檢測發現細胞核形態至接近規則淡藍色橢圓形，Western Blot檢測發現凋亡相關蛋白水平下調，cyto C、AIF外溢和Bax線粒體轉位減少；Bax激活減弱，差異有統計學意義。OA-NO2可激活PPAR γ信號通路。PPAR γsiRNA及GW9662干預細胞後，OA-NO2抗凋亡作用消失。研究表明硝基油酸對缺糖缺氧再灌注損傷造成的腎小管細胞凋亡具有保護作用，硝基油酸抑制凋亡的作用與激活PPAR γ進而抑制凋亡信號通路密切相關。
