《白血病新抗凋亡基因MLAA-34的作用機制研究》是依託西安交通大學，由張鵬宇擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：白血病新抗凋亡基因MLAA-34的作用機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張鵬宇
- 依託單位：西安交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
克隆白血病相關新基因有助於深入闡述白血病發生、發展的分子生物學機制。MLAA-34是我們實驗室篩選出的一個新的白血病相關基因；我們前期研究發現並提出:MLAA-34是功能未知基因CAB39L的一個新轉錄剪接變體、其在白血病患者的外周血單個核細胞中高表達、套用RNAi技術發現其表達抑制可誘導白血病細胞系U937細胞凋亡。本項目擬對MLAA-34基因對白血病細胞的抗凋亡作用開展進一步研究:首先套用MLAA-34的慢病毒表達載體研究MLAA-34過表達對U937細胞凋亡的影響；其次分別套用MLAA-34的RNAi干涉載體與慢病毒表達載體研究其對其它多種白血病細胞株凋亡的影響；最後套用免疫共沉澱、蛋白雙向電泳及質譜分析技術研究MLAA-34蛋白在細胞中的相互作用蛋白分子，以推測其可能的抗凋亡分子機制。通過本項目的實施，可對功能未知基因MLAA-34(CAB39L)的具體抗凋亡機制提供新的線索。
結題摘要
人類白血病的發病機制尚不完全清楚，克隆白血病相關新基因有助於深入闡述白血病發生、發展的分子生物學機制。MLAA-34是我們實驗室用SEREX法從人急性單核細胞白血病細胞系U937的cDNA文庫中篩選出的一個新的腫瘤相關基因；我們前期研究發現並提出： MLAA-34是功能未知基因CAB39L的一個新轉錄剪接變體；發現其在臨床白血病患者的外周血單個核細胞中高表達；利用RNA干擾技術發現其在U937細胞系中具有抗凋亡作用。本項目進一步研究MLAA-34基因對白血病細胞的抗凋亡作用機制。結果表明：1.套用MLAA-34的慢病毒表達載體研究MLAA-34過表達對U937細胞株凋亡的影響，從細胞形態學、MTT實驗及流式細胞儀檢測凋亡均證實：MLAA-34的表達上調可對抗U937細胞凋亡。2.在高表達MLAA-34的人高轉移潛能肝癌細胞株MHCC97-H中，分別套用MLAA-34的RNAi干涉載體與慢病毒表達載體研究其對細胞凋亡的影響，發現MLAA-34具有抗凋亡作用。3. 利用免疫共沉澱（Co-IP）技術處理MLAA-34過表達U937細胞，通過SDS-PAGE、Shotgun蛋白質組學策略結合生物信息學分析對其相互作用的蛋白質進行分析後鑑定出256種蛋白質，其中包含225種已知蛋白和31種未知功能蛋白；我們運用DAVID和KEGG資料庫對225種已知蛋白進行功能分類和信號通路分析，發現其中有132種蛋白質不同程度地參與細胞凋亡或者增殖的生物學過程，MLAA-34抗凋亡作用可能與Ras信號通路、Wnt信號通路、鈣離子通路和趨化因子通路相關；同時發現與p53密切相關的基因CLTC、PPP2CA、SOD2、PARK7和HSPA9，與Caspases家族密切相關的基因TXN、ESR1和YWHAE。通過本項目的實施，進一步證明MLAA-34(CAB39L)基因的抗凋亡作用；MLAA-34抗凋亡作用可能與Ras信號通路、Wnt信號通路、鈣離子通路和趨化因子通路相關。
