《急性單核細胞白血病相關抗原新基因MLAA-22功能的研究》是依託西安交通大學，由古流芳擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：急性單核細胞白血病相關抗原新基因MLAA-22功能的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：古流芳
- 依託單位：西安交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
白血病瘤苗研究的突破有賴於更多TSA和TAA的鑑定和發現，MLAA-22是本課題組前期採用SEREX方法從U937細胞篩選獲得的新基因之一。前期通過RACE技術獲得了其cDNA全長為3070bp，染色體定位於17q11.2，CDS全長2106bp（360-2465bp），編碼的蛋白質由701個胺基酸殘基組成；RNAi下調U937細胞中MLAA-22基因的表達後發現：U937細胞生長速度減緩，凋亡率明顯增加，初步推測MLAA-22可能是一個M5相關的抗凋亡基因。本研究將採用SSH技術對MLAA-22表達下調前後U937細胞的基因表達譜進行比較、分析，從而獲得更多基因功能方面的信息；利用免疫共沉澱技術獲得MLAA-22相互作用的蛋白並進行質譜分析，對MLAA-22進行細胞信號轉導通路定位，初步闡明新型蛋白在M5發病中的的作用及其機制，為MLAA-22套用於急性單核細胞白血病免疫治療奠定理論基礎
結題摘要
MLAA-22是本課題組前期研究獲得的急性單核細胞白血病相關抗原，本研究旨在深入研究、系統評價MLAA-22在M5療效判斷、預後評估及靶向治療方面的套用前景。本研究首先擴大臨床初診、治療後完全緩解及難治/復發M5骨髓血樣本的收集，分別採用螢光實時定量PCR及westernblot檢測其MLAA-22mRNA及蛋白表達水平的變化；同時採用免疫螢光技術對MLAA-22蛋白的細胞定位進行了研究；在基因功能方面採用MLAA-22 RNAi慢病毒顆粒感染U937細胞株，採用DNA Ladder檢測凋亡，並對干擾前後的細胞利用基因晶片技術篩選獲得與MLAA-22相關的基因；利用生物信息學方法預測獲取MLAA-22 HLA-A2+限制性CTL識別的表位，鑑定得到優勢表位肽段，並通過體內、體外實驗驗證了優勢表位肽的特異性CTL殺傷活性。結果表明：初診M5與完全緩解及難治/復發M5患者MLAA-22基因及蛋白表達均存在顯著性差異，表明了MLAA-22在M5中的特異性高表達；免疫螢光技術研究表明MLAA-22蛋白表達於腫瘤細胞的核膜；DNA Ladder檢測發現MLAA-22 mRNA下調後U937細胞凋亡增減加，且細胞凋亡與時間有一定關係，進一步證實了MLAA-22的抗凋亡作用；MLAA-22 mRNA下調前後基因晶片高通量篩選分別獲得了上調和下調水平前10位的相關基因，並對這些可能與MLAA-22作用有關的基因進入下一步研究；生物信息學軟體預測獲得了得分前10的優勢表位肽，體內、體外實驗驗證了優勢表位肽LLPNAIYKV能夠有效激活腫瘤細胞特異性CTL殺傷活性，LLPNAIYKV可作為MLAA-22免疫治療的候選多肽片段。結論：MLAA-22在M5患者中特異性高表達，是M5相關的抗凋亡基因，它在M5的診斷、微小殘留病監測、預後判斷及分子靶向治療中具有一定的套用前景，值得進一步深入研究。
